非选择题-实验题 较难0.4 引用8 组卷197
A蛋白是某种激素合成的关键酶。为鉴定该激素合成的部位及生理作用,科研团队利用无缝克隆技术将A蛋白结合蛋白基因(P基因)与葡萄糖苷酸酶基因(GUS基因)融合,构建A蛋白检测探针,通过农杆菌转化法导入拟南芥进行实验。相关原理、过程及质粒的结构如下图所示。注:①bar为抗草甘膦(一种除草剂)基因;Tetr为四环素抗性基因;Ampr为氨苄青霉素抗性基因②F1、F2、R1、R2为引物③BamH I、Sma I、Bcl I为限制酶
(1)无缝克隆时所需的酶除T5核酸外切酶外还有__________ 。用无缝克隆技术构建GUS-P融合基因的关键是R2引物5'端序列与_________ 互补。
(2)利用双酶切法将融合基因插入Ti质粒,选用的限制酶为__________ 。扩增融合基因所需的引物R1和F2应选用下列引物组合为________ 。
①5'-…CTTGGATGAT-3'②5'-…TAAGTTGTCT-3'③5'-…ATTCAACAGA-3' ④5'-…TCTGTTGAAT-3'
(3)利用农杆菌转化法将融合基因导入农杆菌、拟南芥细胞的过程中,需要筛选两次,这两次筛选分别是_________ 。
(4)葡萄糖苷酸酶可以水解X-Gluc呈蓝色,将转基因拟南芥置于不同培养液中培养一段时间,然后分离不同部位的组织分别加入X-Gluc进行鉴定,结果如下表所示:
分析表明,该激素最主要的合成部位是__________ ,通过实验结果分析该激素的生理作用是_________ 。
(1)无缝克隆时所需的酶除T5核酸外切酶外还有
(2)利用双酶切法将融合基因插入Ti质粒,选用的限制酶为
①5'-…CTTGGATGAT-3'②5'-…TAAGTTGTCT-3'③5'-…ATTCAACAGA-3' ④5'-…TCTGTTGAAT-3'
(3)利用农杆菌转化法将融合基因导入农杆菌、拟南芥细胞的过程中,需要筛选两次,这两次筛选分别是
(4)葡萄糖苷酸酶可以水解X-Gluc呈蓝色,将转基因拟南芥置于不同培养液中培养一段时间,然后分离不同部位的组织分别加入X-Gluc进行鉴定,结果如下表所示:
部位 | 根 | 茎 | 叶 |
完全培养液 | 蓝色 | 浅蓝 | 浅蓝 |
缺磷培养液 | 深蓝 | 蓝色 | 浅蓝 |
2024·山东潍坊·二模
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磷脂酸(PA)是调节植物生长发育和逆境响应的重要信使物质。为了解植物细胞中PA的动态变化,研究人员用无缝克隆技术将高度专一的PA结合蛋白(PABD)基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因融合,构建有效监测细胞PA变化的荧光探针,并测定拟南芥细胞内PA含量。无缝克隆技术连接DNA片段的机理和构建荧光探针表达载体的过程如下图,请回答:
(1)无缝克隆时,T5核酸外切酶沿___ (填“5'→3'”或“3'→5'”)的方向水解DNA,形成黏性末端。T5核酸外切酶催化的最适温度为37°C,而过程①选择的温度为50°C,目的是___ 。
(2)过程②两个片段复性后存在“缺口”,因此过程③所需的酶有___ 。
(3)PCR技术中通常要设计引物,引物的作用是___ ,有时需要在引物的一端增加限制酶酶切位点,目的通常是___ 。PCR扩增PABD基因时需依据PABD基因一端的核苷酸序列和载体一端的核苷酸序列设计引物R1。据图分析扩增目的基因片段时,所用的引物F1和R2可对应下表中的___ (填序号)。
(4)利用农杆菌花序侵染法转化拟南芥,将获得的种子进行表面消毒,均匀铺在含___ 的MS培养基上进行筛选和鉴定,将筛选得到的种子种植可得到转基因拟南芥,通过观测转基因拟南芥根尖细胞中___ ,了解PA的分布和含量。
注:bar为草胺膦抗性基因;Kanr为卡那霉素抗性基因。
(1)无缝克隆时,T5核酸外切酶沿
(2)过程②两个片段复性后存在“缺口”,因此过程③所需的酶有
(3)PCR技术中通常要设计引物,引物的作用是
① | 5'-TCCGGACTCAGATCTCGAGC-3' |
② | 5'-AGCTATAGTTCTAGATCTAGATTAACTAGTCTTAGTGGCGTC-3' |
③ | 5'-TATCGATGGCGCCAGCTGAGGATGGTGAGCAAGGGCGA-3' |
④ | 5'GCTCGAGATCTGAGTCCGGACTTGTACAGCTCGTCCA-3' |
(4)利用农杆菌花序侵染法转化拟南芥,将获得的种子进行表面消毒,均匀铺在含
为使水稻获得抗除草剂性状,科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入水稻植株,获得抗草甘膦转基因水稻。
注:GUS基因表达产物经染色能从无色变成蓝色
(1)将草甘膦抗性基因作为________ ,与Ti质粒用相同的______ 和DNA连接酶处理构建基因表达载体。
(2)用________ 处理农杆菌后获得感受态细胞,将其与基因表达载体混合完成转化后,在添加_____ 的培养基中,经筛选1得到含基因表达载体的农杆菌。
(3)取某品种水稻的幼胚,先进行_______ 处理,然后接种到培养基中,水稻幼胚细胞发生___________ 形成愈伤组织。用含基因表达载体的农杆菌侵染该愈伤组织。
(4)PCR扩增时需要根据草甘膦抗性基因序列设计_______ 种引物,引物是_________________ 。
(5)利用PCR技术,可以鉴定被侵染的愈伤组织中是否含有草甘膦抗性基因。草甘膦抗性基因的部分序列如下:
5’---ATGGCT………AGGAAC---3’
3’---TACCGA………TCCTTG---5’
根据上述序列应选择引物 (填字母)进行PCR。
(6)除了鉴定愈伤组织中是否含有目的基因以外,还可以利用GUS基因表达产物的鉴定进行图中的筛选2,以确定目的基因是否____ 。两次筛选后得到的转基因愈伤组织经过细胞的________ 过程,获得转基因水稻。
注:GUS基因表达产物经染色能从无色变成蓝色
(1)将草甘膦抗性基因作为
(2)用
(3)取某品种水稻的幼胚,先进行
(4)PCR扩增时需要根据草甘膦抗性基因序列设计
(5)利用PCR技术,可以鉴定被侵染的愈伤组织中是否含有草甘膦抗性基因。草甘膦抗性基因的部分序列如下:
5’---ATGGCT………AGGAAC---3’
3’---TACCGA………TCCTTG---5’
根据上述序列应选择引物 (填字母)进行PCR。
A.引物:5’-TACCGA-3’ | B.引物:5’-GTTCCT-3’ |
C.引物:5’-AUGGCU-3’ | D.引物:5’-ATGGCT-3’ |
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