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非选择题-实验题 适中0.65 引用2 组卷86
南方水稻黑条矮缩病是由南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)引起的,是影响水稻生产的重要病害之一。SRBSDV基因组包含10条双链RNA,共编码13个蛋白。基因组中P基因的功能未知。有学者提出,克隆SRBSDV的P基因并转入原核细胞内表达,可为南方水稻黑条矮缩病的诊断及P基因功能的研究奠定基础。请回答下列问题:
(1)提取南方水稻黑条矮缩病病叶中的______,经反转录合成cDNA;利用特异性引物进行PCR扩增。扩增时除cDNA、引物外,还需要加入____________;为使扩增得到的目的DNA片段能够与载体连接,需要在引物两端添加______序列。
(2)将克隆的P基因与质粒连接,构建基因表达载体,此过程中需要用限制酶切割DNA形成黏性末端,再用____________将二者连接,形成一个重组质粒,需要连接______个磷酸二酯键。
(3)利用电泳技术可将不同相对分子质量的蛋白质分离。若要验证目的基因是否在大肠杆菌细胞中成功表达,则需比较非转基因宿主大肠杆菌、____________的大肠杆菌、____________的大肠杆菌三者的蛋白质电泳结果差异。
2024·陕西西安·二模
知识点:PCR扩增的原理与过程DNA重组技术的基本工具基因表达载体的构建目的基因的检测与鉴定 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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M蛋白(由M基因编码)是一类广泛存在于动植物中的金属结合蛋白,具有吸附重金属的作用,M基因能在大肠杆菌和动物A的肝细胞中特异性表达。现设计实验如下:
1.实验一:科研人员将外源DNA片段F插入M基因的特定位置,再通过一定的技术手段获得M基因失活的转基因克隆动物A,流程如图1所示。
2.实验二:将M基因导入大肠杆菌构建具有吸附重金属的作用的工程菌,如图2所示。

(1)在构建含有片段F的重组质粒过程中,用于切割质粒DNA的工具酶能将特定部位的两个核苷酸之间的____________断开。
(2)在进行动物A成纤维细胞培养时,需要定期更换培养液,目的是______
(3)鉴定转基因动物:通过动物细胞融合等技术制备M蛋白的单克隆抗体,简要写出利用此抗体确定克隆动物A中M基因是否失活的实验思路。_____________
(4)根据M蛋白cDNA的核苷酸序列设计了相应的引物(图2甲),通过PCR扩增M基因。已知A位点和B位点分别是起始密码子和终止密码子对应的基因位置。选用的引物组合应为_________。实验二中,PCR所用的DNA聚合酶扩增出的M基因的末端为平末端。由于载体E只有能产生黏性末端的酶切位点,需借助中间载体P将M基因接入载体E。载体P和载体E的酶切位点及相应的酶切序列如图2乙所示。
①选用______酶将载体P切开,再用_____DNA连接酶将M基因与载体P相连,构成重组载体P′。
②由于载体P'不具有表达M基因的______________故应该选用____________酶组合对载体P'和载体E进行酶切,将切下的M基因和载体E用DNA连接酶进行连接,将得到的混合物导入到用_______处理的大肠杆菌,筛出M工程菌。
(5)M基因在工程菌的表达量如图所示。请回答该结果能否说明已经成功构建了具有较强吸附废水中重金属能力的工程菌的理由并说明原因?______________________

人血清白蛋白(HSA)主要在肝脏中合成,具有重要的医用价值。为制备大量的HSA,以基因工程技术获取重组HSA的两条途径如图1所示;图2中的甲为获取的含有目的基因(HSA基因)的DNA片段,Sau3A Ⅰ、EcoR Ⅰ、BamHⅠ为三种限制酶,图中箭头所指为三种限制酶的酶切位点;图乙是三种限制酶的识别序列与酶切位点示意图;图丙是Ti质粒结构示意图。回答下列问题:


(1)从人体细胞中直接提取的HSA基因,导入到大肠杆菌细胞中不能表达,原因可能是______________。为了获得能在大肠杆菌细胞中表达的HSA基因,可从人体的_______________细胞中提取mRNA,通过反转录获得cDNA(双链),再利用PCR进行扩增,该过程需向反应体系中加入__________________________、4种脱氧核苷酸、引物和Mg2,若扩增后得到了32个HSA基因,则该过程共需要______________个引物。
(2)构建基因表达载体时,不能选择限制酶Sau3A Ⅰ切割目的基因,原因是____________________________,为了防止目的基因与质粒间的任意连接,应选择限制酶Sau3A Ⅰ、EcoR Ⅰ切割质粒,选择限制酶___________________充分切割目的基因,质粒上抗生素抗性基因的作用是____________________
(3)将目的基因导入大肠杆菌时,常用________处理细胞。为了检测水稻胚乳细胞中是否合成了HSA蛋白,可用__________方法;若胚乳细胞中含有HSA基因,但是检测不到HSA蛋白,原因可能是_________________________________

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