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非选择题-解答题 较难0.4 引用1 组卷78
SLA-2基因是猪白细胞抗原基因,在动物免疫应答中发挥作用。为研究SLA-2基因的结构和功能,科研人员克隆到SLA-2基因,并在构建真核表达质粒后,转染猪肾上皮细胞,进行后续研究,其主要过程如下图(SLA-2基因长度为1100bp,质粒B的总长度为4445bp,质粒中数字代表在京限制酶切点与复制原点间的距离)。请回答:

限制酶

BclⅠ

NotⅠ

XhaⅠ

Sau3AⅠ

识别序列及切割位点

T↓GATCA

ACTAG↑T

GC↓GGCCGC

CGCCGG↑CG

T↓CTAGA

AGATC↑T

↓GATC

CTAG↑


(1)从猪基因组中特异地克隆出SLA-2基因的关键是_______,依据基因片段的大小,实验室可利用_______技术初步鉴定该基因。
(2)限制酶BclI与Sau3AI切割相同DNA形成的黏性末端是否相同?_______,其中_______在该DNA上的切点可能更多。
(3)下列引物序列中,图示过程①中的引物是_______。为提出SLA-2基因的表达量,研究人员同时对基因的5'序列进行密码子优化设计(如GGT优化为GGC),优化的序列位于基因的________(编码区/编码区上游/编码区下游),这种优化实现变异属于_______
①5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAATCCTC
②5'-GTTGCGGCCGCTCACACTGTGGCTTGGTAACAC
③5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAATCCTC
④5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGCCCTTGGTC
(4)过程②和过程⑤中均构建了重组质粒,其中属于真核表达质粒是在过程_______中构建的,这类表达质粒上必须有目的基因、_______等结构,其目的是_______
23-24高二下·江苏淮安·期中
知识点:基因突变PCR扩增的原理与过程DNA重组技术的基本工具基因表达载体的构建 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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白细胞抗原基因(SLA-2基因)是重要的免疫应答基因。科研人员克隆SLA-2基因,构建该基因的表达载体,进而获得该基因优势表达的猪肾上皮细胞。该实验的主要流程如图1(已知SLA-2基因长度为1100bp,质粒B的总长度为4445bp,其限制酶切割位点后的数字表示距复制原点的距离)。其中四种限制酶识别序列和切割位点如下表,回答下列问题:
   

限制酶

BclI

NotI

XbaI

Sau3AI

识别序列及切割位点

T↓GATCA

GC↓GGCCGC

T↓CTAGA

↓GATC

(1)过程①中,PCR扩增SLA-2基因的原理是______,为了使扩增的SLA-2基因与质粒连接,需要在引物的____(填3或5)端加上_____限制酶识别序列。扩增结束后,常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物,检测发现扩增产物中除目的基因外,还有其他不同大小片段的非目的基因,可能的原因一般有以下哪些____(填序号)。
①模板受到污染②复性温度过高③引物太短④延伸温度偏低
(2)过程②将重组质粒导入大肠杆菌的目的是_____,该过程需要用____处理大肠杆菌,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,然后将大肠杆菌涂布在含有____(抗生素)的培养基上培养。
(3)若用Sau3AI和XbaI完全酶切质粒C后进行电泳,依据图2,在图2上画出可能得到的电泳条带,同时在右侧标出DNA片段长度____________________
   
(4)科研中,一般利用最小致死浓度(使某种细胞全部死亡的最小浓度)的嘌呤霉素溶液处理以初步筛选转化的猪肾上皮细胞。为确定初步筛选转化猪肾上皮细胞的最小致死嘌呤霉素浓度,科研人员利用___细胞进行相关实验,结果如图3。根据实验结果应使用浓度为____的嘌呤霉素溶液初步筛选转化的猪肾上皮细胞,理由是_____
   
白细胞表面抗原2(SLA-2)在抗原呈递、机体器官移植以及免疫应答方面有着重要作用。为进一步研究SLA-2的结构与功能,科研人员以能稳定传代的猪肾上皮细胞为材料,构建了稳定高表达SLA-2基因的细胞株,过程如下图。其中,Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Puror为嘌呤霉素抗性基因,BclI、NotI、XbaI、San3AI为限制酶酶切位点,括号内数值表示距复制原点的长度。请回答下列问题。

限制酶

BclⅠ

NotⅠ

XbaⅠ

San3AⅠ

识别序列及切割位点

T↓GATCA

GC↓GGCCGC

T↓CTAGA

↓GATC


(1)过程①需要的酶有_________与细胞内基因相比,过程①获得的SLA-2基因在结构上不具有_________。为使获得的SLA-2基因与质粒1定向连接,扩增时应选用的1对引物为_________
a.5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3'
b.5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3
c.5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3'
d.5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3'
(2)过程②为酶切、连接后的重组质粒转化处于___________的大肠杆菌,转化后采用含_________的平板筛选。筛选获得的大肠杆菌需扩大培养,其目的是__________
(3)过程⑤需将SLA-2基因插入启动子与终止子之间,目的是___________。为鉴定与验证重组质粒3,研究人员用NotI和Sar3AI完全酶切质粒2和重组质粒3后电泳并比较。请在答题纸相应位置画当可能得到的电泳条带。__________
(4)研究中,一般利用最小致死浓度(使某种细胞全部死亡的最小浓度)的嘌呤霉素溶液浸染细胞以筛选出转化的猪肾上皮细胞。为确定最小致死浓度,科研人员利用未转化的猪肾上皮细胞进行了相关实验.结果如下图。根据结果,应使用浓度为___________的嘌呤霉素溶液浸染,理由是__________

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