非选择题-解答题 较难0.4 引用1 组卷78
SLA-2基因是猪白细胞抗原基因,在动物免疫应答中发挥作用。为研究SLA-2基因的结构和功能,科研人员克隆到SLA-2基因,并在构建真核表达质粒后,转染猪肾上皮细胞,进行后续研究,其主要过程如下图(SLA-2基因长度为1100bp,质粒B的总长度为4445bp,质粒中数字代表在京限制酶切点与复制原点间的距离)。请回答:
(1)从猪基因组中特异地克隆出SLA-2基因的关键是_______ ,依据基因片段的大小,实验室可利用_______ 技术初步鉴定该基因。
(2)限制酶BclI与Sau3AI切割相同DNA形成的黏性末端是否相同?_______ ,其中_______ 在该DNA上的切点可能更多。
(3)下列引物序列中,图示过程①中的引物是_______ 。为提出SLA-2基因的表达量,研究人员同时对基因的5'序列进行密码子优化设计(如GGT优化为GGC),优化的序列位于基因的________ (编码区/编码区上游/编码区下游),这种优化实现变异属于_______ 。
①5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAATCCTC
②5'-GTTGCGGCCGCTCACACTGTGGCTTGGTAACAC
③5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAATCCTC
④5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGCCCTTGGTC
(4)过程②和过程⑤中均构建了重组质粒,其中属于真核表达质粒是在过程_______ 中构建的,这类表达质粒上必须有目的基因、_______ 等结构,其目的是_______ 。
限制酶 | BclⅠ | NotⅠ | XhaⅠ | Sau3AⅠ |
识别序列及切割位点 | T↓GATCA ACTAG↑T | GC↓GGCCGC CGCCGG↑CG | T↓CTAGA AGATC↑T | ↓GATC CTAG↑ |
(1)从猪基因组中特异地克隆出SLA-2基因的关键是
(2)限制酶BclI与Sau3AI切割相同DNA形成的黏性末端是否相同?
(3)下列引物序列中,图示过程①中的引物是
①5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAATCCTC
②5'-GTTGCGGCCGCTCACACTGTGGCTTGGTAACAC
③5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAATCCTC
④5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGCCCTTGGTC
(4)过程②和过程⑤中均构建了重组质粒,其中属于真核表达质粒是在过程
23-24高二下·江苏淮安·期中
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科研人员克隆了猪白细胞抗原基因(SLA-2基因),构建了该基因的真核表达载体,进行了猪肾上皮细胞表达研究。实验的主要流程如下,SLA-2基因长度为1100bp,质粒B的总长度为4445bp,其限制酶切点后的数字表示距复制原点的距离。可能用到的限制酶识别序列和切割位点如下表所示。
(1)过程①中,PCR扩增SLA-2的原理是____ ,下列4种引物中应选择的是____ 。
引物a:5’-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3’
引物b:5’-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3’
引物c:5’-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3’
引物d:5’-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3’
(2)过程②将重组质粒导入大肠杆菌的目的是____ ,该过程需要用____ 处理大肠杆菌,使其成为感受态细胞。然后将大肠杆菌涂布在含有____ (抗生素)的培养基上培养。
(3)若用限制酶Sau3AI和XbaI完全切割质粒B和质粒C后电泳,请在图中画出预测的电泳结果____ 。
(4)科研中常用嘌呤霉素对真核细胞进行筛选,嘌呤霉素对细胞的毒性实验结果如图,根据实验结果最佳的嘌霉素筛选浓度为____ ,原因是____ 。
(5)筛选产SLA-2抗原肽的猪肾上皮细胞的方法是____ 。
限制酶 | BclI | NotI | XbaI | Sau3AI |
识别序列及切割位点 | T↓GATCA | GC↓GGCCGC | T↓CTAGA | ↓GATC |
(1)过程①中,PCR扩增SLA-2的原理是
引物a:5’-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3’
引物b:5’-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3’
引物c:5’-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3’
引物d:5’-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3’
(2)过程②将重组质粒导入大肠杆菌的目的是
(3)若用限制酶Sau3AI和XbaI完全切割质粒B和质粒C后电泳,请在图中画出预测的电泳结果
(4)科研中常用嘌呤霉素对真核细胞进行筛选,嘌呤霉素对细胞的毒性实验结果如图,根据实验结果最佳的嘌霉素筛选浓度为
(5)筛选产SLA-2抗原肽的猪肾上皮细胞的方法是
白细胞抗原基因(SLA-2基因)是重要的免疫应答基因。科研人员克隆SLA-2基因,构建该基因的表达载体,进而获得该基因优势表达的猪肾上皮细胞。该实验的主要流程如图1(已知SLA-2基因长度为1100bp,质粒B的总长度为4445bp,其限制酶切割位点后的数字表示距复制原点的距离)。其中四种限制酶识别序列和切割位点如下表,回答下列问题:
(1)过程①中,PCR扩增SLA-2基因的原理是______ ,为了使扩增的SLA-2基因与质粒连接,需要在引物的____ (填3或5)端加上_____ 限制酶识别序列。扩增结束后,常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物,检测发现扩增产物中除目的基因外,还有其他不同大小片段的非目的基因,可能的原因一般有以下哪些____ (填序号)。
①模板受到污染②复性温度过高③引物太短④延伸温度偏低
(2)过程②将重组质粒导入大肠杆菌的目的是_____ ,该过程需要用____ 处理大肠杆菌,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,然后将大肠杆菌涂布在含有____ (抗生素)的培养基上培养。
(3)若用Sau3AI和XbaI完全酶切质粒C后进行电泳,依据图2,在图2上画出可能得到的电泳条带,同时在右侧标出DNA片段长度____________________ 。
(4)科研中,一般利用最小致死浓度(使某种细胞全部死亡的最小浓度)的嘌呤霉素溶液处理以初步筛选转化的猪肾上皮细胞。为确定初步筛选转化猪肾上皮细胞的最小致死嘌呤霉素浓度,科研人员利用___ 细胞进行相关实验,结果如图3。根据实验结果应使用浓度为____ 的嘌呤霉素溶液初步筛选转化的猪肾上皮细胞,理由是_____ 。
限制酶 | BclI | NotI | XbaI | Sau3AI |
识别序列及切割位点 | T↓GATCA | GC↓GGCCGC | T↓CTAGA | ↓GATC |
①模板受到污染②复性温度过高③引物太短④延伸温度偏低
(2)过程②将重组质粒导入大肠杆菌的目的是
(3)若用Sau3AI和XbaI完全酶切质粒C后进行电泳,依据图2,在图2上画出可能得到的电泳条带,同时在右侧标出DNA片段长度
(4)科研中,一般利用最小致死浓度(使某种细胞全部死亡的最小浓度)的嘌呤霉素溶液处理以初步筛选转化的猪肾上皮细胞。为确定初步筛选转化猪肾上皮细胞的最小致死嘌呤霉素浓度,科研人员利用
白细胞表面抗原2(SLA-2)在抗原呈递、机体器官移植以及免疫应答方面有着重要作用。为进一步研究SLA-2的结构与功能,科研人员以能稳定传代的猪肾上皮细胞为材料,构建了稳定高表达SLA-2基因的细胞株,过程如下图。其中,Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Puror为嘌呤霉素抗性基因,BclI、NotI、XbaI、San3AI为限制酶酶切位点,括号内数值表示距复制原点的长度。请回答下列问题。
(1)过程①需要的酶有_________ 与细胞内基因相比,过程①获得的SLA-2基因在结构上不具有_________ 。为使获得的SLA-2基因与质粒1定向连接,扩增时应选用的1对引物为_________ 。
a.5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3'
b.5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3
c.5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3'
d.5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3'
(2)过程②为酶切、连接后的重组质粒转化处于___________ 的大肠杆菌,转化后采用含_________ 的平板筛选。筛选获得的大肠杆菌需扩大培养,其目的是__________ 。
(3)过程⑤需将SLA-2基因插入启动子与终止子之间,目的是___________ 。为鉴定与验证重组质粒3,研究人员用NotI和Sar3AI完全酶切质粒2和重组质粒3后电泳并比较。请在答题纸相应位置画当可能得到的电泳条带。__________
(4)研究中,一般利用最小致死浓度(使某种细胞全部死亡的最小浓度)的嘌呤霉素溶液浸染细胞以筛选出转化的猪肾上皮细胞。为确定最小致死浓度,科研人员利用未转化的猪肾上皮细胞进行了相关实验.结果如下图。根据结果,应使用浓度为___________ 的嘌呤霉素溶液浸染,理由是__________ 。
限制酶 | BclⅠ | NotⅠ | XbaⅠ | San3AⅠ |
识别序列及切割位点 | T↓GATCA | GC↓GGCCGC | T↓CTAGA | ↓GATC |
(1)过程①需要的酶有
a.5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3'
b.5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3
c.5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3'
d.5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3'
(2)过程②为酶切、连接后的重组质粒转化处于
(3)过程⑤需将SLA-2基因插入启动子与终止子之间,目的是
(4)研究中,一般利用最小致死浓度(使某种细胞全部死亡的最小浓度)的嘌呤霉素溶液浸染细胞以筛选出转化的猪肾上皮细胞。为确定最小致死浓度,科研人员利用未转化的猪肾上皮细胞进行了相关实验.结果如下图。根据结果,应使用浓度为
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