非选择题-解答题 较难0.4 引用2 组卷141
狂犬病是由狂犬病病毒(RABV)感染中枢神经系统引起的传染病,人和动物感染后一旦出现临床症状,死亡率几乎100%。当前,接种疫苗和抗体注射是预防狂犬病最为有效的途径。RABV是一种RNA弹状病毒,RABV-G(病毒表面糖蛋白)是RABV诱导机体产生抗体的唯一抗原,利用基因工程技术可获得重组RABV-G蛋白(rRVGP)的亚单位疫苗,并制备相应的单克隆抗体。回答下列相关问题:
(1)在国内外研究中,rRVGP已经在多种细胞系统中实现了合成。在昆虫细胞系统中获取疫苗过程如下:
①提取病毒的RNA进行RT-PCR,即将病毒RNA经过______ 过程获得cDNA,并对cDNA进行PCR扩增。RT-PCR过程中需要加入的酶有______ 。
②利用______ 进行核酸分子杂交或利用______ 技术鉴定PCR产物以检测是否获得正确的目的基因。
③待用②中后者方法鉴定结束后,用刀片切割______ 并回收目的基因,从而达到提纯的目的。 接着将纯化得到的目的基因与特定质粒酶切连接,再利用______ 法将重组DNA分子导入果蝇S2细胞,待表达后破碎细胞,最后利用______ 技术对rRVGP进行检测。
(2)2023年诺贝尔生理学或医学奖颁布给了两位在mRNA疫苗上做出突破性贡献的先驱。在狂犬病的预防中,同样也可以使用mRNA疫苗,但缺陷是机体缺少______ (填“RNA聚合酶”或“DNA聚合酶”),使得mRNA进入细胞后不能在体内持续产生大量抗原,且mRNA在体内容易被降解。对此研究人员研制出一种自扩增RNA(saRNA)疫苗,即在mRNA中加入一段可复制的序列,并对mRNA5'端加帽,3'端加尾部修饰,使其能在机体内稳定存在。相比于传统的mRNA疫苗,saRNA疫苗还具有的优点是______ 。
(3)RABV-G的单克隆抗体制备及鉴定。过程如下:
①将RABV-G作为抗原对小鼠多次注射后,从脾脏中分离出小鼠的B淋巴细胞与可以______ 的骨髓瘤细胞融合,并利用选择培养基对融合细胞进行筛选。
②对筛选后的细胞进行______ 培养和抗体检测,最后获得所需的杂交瘤细胞。
③将获得的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔内培养或体外培养获得单克隆抗体。
(4)除了利用细胞融合技术制备单克隆抗体,还可以利用转基因动物乳腺生物反应器生产单克隆抗体。过程如下:
①体外获取单克隆抗体的基因后,将该基因插入到乳腺细胞特异性表达的乳清酸性蛋白(WAP)基因组中,为减少后续分离单克隆抗体的难度,可对原WAP基因进行______ ,但必须保留原有的启动子和调控序列,且插入的位点在调控序列下游,以保证基因的正确表达。
②将上述重组基因导入哺乳动物细胞,通过同源重组技术获得经转化的细胞。
③将符合要求的细胞的细胞核植入_____ ,从而形成融合细胞。将融合细胞进行______ ,一段时间后植入雌性动物代孕体,直到母体分娩出转基因动物。
④待个体长大后,从乳汁中分离纯化RABV-G单克隆抗体。
(1)在国内外研究中,rRVGP已经在多种细胞系统中实现了合成。在昆虫细胞系统中获取疫苗过程如下:
①提取病毒的RNA进行RT-PCR,即将病毒RNA经过
②利用
③待用②中后者方法鉴定结束后,用刀片切割
(2)2023年诺贝尔生理学或医学奖颁布给了两位在mRNA疫苗上做出突破性贡献的先驱。在狂犬病的预防中,同样也可以使用mRNA疫苗,但缺陷是机体缺少
(3)RABV-G的单克隆抗体制备及鉴定。过程如下:
①将RABV-G作为抗原对小鼠多次注射后,从脾脏中分离出小鼠的B淋巴细胞与可以
②对筛选后的细胞进行
③将获得的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔内培养或体外培养获得单克隆抗体。
(4)除了利用细胞融合技术制备单克隆抗体,还可以利用转基因动物乳腺生物反应器生产单克隆抗体。过程如下:
①体外获取单克隆抗体的基因后,将该基因插入到乳腺细胞特异性表达的乳清酸性蛋白(WAP)基因组中,为减少后续分离单克隆抗体的难度,可对原WAP基因进行
②将上述重组基因导入哺乳动物细胞,通过同源重组技术获得经转化的细胞。
③将符合要求的细胞的细胞核植入
④待个体长大后,从乳汁中分离纯化RABV-G单克隆抗体。
23-24高二下·浙江杭州·期中
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