酿酒酵母细胞质钙离子浓度的调控与酿酒酵母的抗逆性、生长增殖过程有关。Cchlp是一种位于酿酒酵母细胞膜的钙离子通道蛋白、调控细胞外钙离子流入细胞质。研究小组利用基因工程获取Cchlp抗原、制备Cchlp单克隆抗体来检测酿酒酵母Cehlp的表达情况。其中制备Cchlp抗原的流程如图1所示：
   
请回答以下问题：
(1)过程①需要_____________酶进行催化。
(2)Cchlp含2039个氨基酸，其中抗原区域约含300个氨基酸。现根据抗原区域氨基酸序列，查找对应基因序列，设计如下引物进行PCR。（引物F为基因上游引物，引物R为基因下游引物）
   
引物F：5'-AGGAGG……CCATT-3'
引物R：S-GATTCC……GGGTT-3'
为使PCR获得的Cchlp抗原基因能与PET-28a质粒正确连接，应在引物中加入合适的限制酶识别序列。加入限制酶序列后引物F序列为5'GACACCATATGAGGACG……CCATT-3'（下划线部分为限制酶识别序列），引物R序列应为_______________。

A．5'AGGACG……CCATTCATATGGACAC-3'

B．S'GACACCTCGAGGATTCC……GGGTT-3'

C．S-GATTCC……GGGTTCTCGAGGAGAC-3'

D．5'-GACACCCCGGGGATTCC……GGGTT-3'

(3)将PCR产物和标准参照物分别加入泳道1、泳道2进行电泳。加样孔位于_______________（填写“甲”或“乙”）端。泳道1条带中的PCR产物_____________（填写“一定”或“可能”或“不”）是目的基因，理由是_________________。
(4)应在含__________________的固体培养基中培养重组大肠杆菌，经鉴定获得含目的基因的大肠杆菌，分离提纯得到Cchlp抗原。
(5)利用杂交瘤细胞技术制备Cchlp单克隆抗体的过程中有两次需要用到Cchlp抗原，请写出其使用方法________________。