试题详情
非选择题-解答题 适中0.65 引用4 组卷249
血管为肿瘤的增殖和转移提供了有利条件。M蛋白是人体内抑制血管生长的因子,可作为肿瘤治疗的潜在药物。将控制M蛋白合成的基因m导入酵母细胞中进行表达,可获得大量M蛋白。下图为酵母表达载体(质粒K)的示意图(SacI、EcoRI、NotI、SalI为限制酶切割位点,切割产生的黏性末端均不相同)。

回答下列问题。
(1)5'—AOX位于基因的上游,紧邻转录起始位点,该结构最可能是____
(2)已知基因m中无上述任一限制酶切割位点。为提高连接效率并保证基因m和载体的正确连接,对基因m进行PCR扩增时,需在基因m的上游引物和下游引物中分别引入____限制酶切割位点。
(3)将PCR扩增获得的基因m与酶切后的质粒K进行连接,构建基因m的表达载体。随后,将酶切后的质粒K(a组)与构建的表达载体(b组)分别转入大肠杆菌,并在含有氨苄青霉素的培养基上培养。已知未环化的质粒会被大肠杆菌核酸酶水解,若a组与b组培养基中均有菌落产生,a组出现菌落的原因可能是杂菌污染或____(答出1点即可)。由此推测,b组培养基上的菌落____(填“一定”或“不一定”)含有基因m。
(4)将构建成功的基因m表达载体导入组氨酸合成缺失的酵母突变体中,在____的培养基上培养,以筛选出含有表达载体的酵母细胞。
(5)可运用____技术在分子水平上检测M蛋白是否成功表达。若观察到M蛋白对血管内皮细胞增殖有抑制作用,说明获得的M蛋白____
2024·河南周口·二模
知识点:PCR扩增的原理与过程基因表达载体的构建目的基因的检测与鉴定 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
类题推荐
血管为肿瘤的增殖和转移提供了有利条件。M蛋白是人体内抑制血管生长的因子,可作为肿瘤治疗的潜在药物。将控制M蛋白合成的基因m导入酵母细胞中进行表达,可获得大量M蛋白。如图为酵母表达载体(质粒K)的示意图(SacⅠ、EcoRⅠ、NotⅠ、SalⅠ为限制酶切割位点,切割产生的黏性末端均不相同)。

回答下列问题:
(1)在基因表达载体中,5′-AOX紧邻转录起始位点,该结构最可能是________
(2)基因工程中获取目的基因的常用方法有________(写出2种)和利用PCR技术扩增。为使目的基因m(该基因序列不含图中限制酶的识别序列)与载体正确连接,应在扩增的目的基因m两端分别引入________两种不同限制酶的识别序列。PCR反应一般由95℃热变性、55℃复性、72℃延伸三个步骤,经过多次循环完成。延伸阶段选用72℃是综合考虑了两个因素,这两个因素是________
(3)将PCR扩增获得的基因m与酶切后的质粒K进行连接,构建基因m的表达载体。随后,将其转入大肠杆菌,涂布在含有氨苄青霉素的培养基上培养。已知未环化的质粒会被大肠杆菌核酸酶水解,若培养一段时间后培养基上出现了菌落,还需要对菌落中的DNA分子测序,筛选出含目的基因表达载体的大肠杆菌,原因是________
(4)将构建成功的基因m表达载体导入组氨酸合成缺失的酵母突变体中,在________的培养基上培养,以筛选出含有表达载体的酵母细胞。现已鉴定目的基因m已导入酵母细胞,但没有得到具有生物活性的M蛋白,需要检测是转录还是翻译异常。检测酵母细胞是否转录出mRNA的实验思路是:________
酵母细胞基因转录需要转录因子,转录因子包括DNA结合结构域(DNA—BD)和转录激活结构域(DNA—AD),两结构域分开时不能激活转录。如果将待测蛋白质X与DNA—BD融合,蛋白质Y与DNA—AD融合,蛋白质X和Y有相互作用时,两结构域能重新呈现完整转录因子活性,并可激活报告基因的转录,过程如图1所示。已知报告基因LacZ表达的酶可以将无色化合物X—gal水解成蓝色产物。研人员为了验证蛋白质X和Y是否具有相互作用,分别构建不同的酵母表达载体(如图2和图3所示),其中Ampc为氨苄青霉素抗性基因,HIS3和TRPI分别为控制组氨酸和色氨酸合成的基因。分析回答下列有关问题:

(1)获得BD—X蛋白和AD—Y蛋白的关键是将相应基因序列连接形成___。X与Y的结合能使转录因子的BD和AD同时结合到报告基因的上游,进而招募___催化LacZ基因的转录。
(2)为将目的基因定向插入相应位点,扩增蛋白质X编码区序列时需在两个引物的5端分别添加序列___;为验证目的基因在PCR扩增时是否发生了基因突变,可对PCR产物进行___(填“电泳”“测序”或“电泳或测序”)。
(3)pLexA—JL和pB42AD载体的构建时用特定限制酶切割目的基因和载体并连接,连接产物导入大肠杆菌后扩增;为确定质粒构建是否成功,需要抽提两种质粒并酶切,并___
(4)将成功构建的pLexA—JL和pB42AD载体导入___(填“同一个”或“不同的”)营养缺陷型的酵母菌中,与普通酵母菌相比,该营养缺陷型的酵母菌的特点是___
(5)请预测实验结果并写出相应的实验结论:___

组卷网是一个信息分享及获取的平台,不能确保所有知识产权权属清晰,如您发现相关试题侵犯您的合法权益,请联系组卷网