非选择题-实验题 较难0.4 引用1 组卷262
具核梭杆菌为一种强粘附性消化道细菌,侵入肠黏膜后可诱导局部炎症和细胞因子的表达增加,导致结直肠肿瘤的形成。细菌培养与鉴定等传统检测技术费时费力,不能满足快速检测的需求。科研人员采用基于滚环扩增技术(RCA)的荧光标记滚环扩增检测方法,实现了在微量样品及复杂环境下的高灵敏度和高特异性的检测。下图1为RCA的原理示意图,图2为荧光标记滚环扩增检测过程示意图,其中,nusG基因为具核梭杆菌的特异性基因,锁式探针为依据nusG基因序列设计出来的单链DNA分子,检测探针中的荧光基团(FAM)距离淬灭基团(BHQ-1)在一定的范围内时,荧光会被淬灭。请回答下列问题。___ RCA产生长重复单链DNA过程中,Phi29DNA聚合酶既需催化___ 键的形成,也需催化___ 键的断裂。
(2)过程②为锁式探针进行连接以实现环化,该过程中需要的酶是___ 过程③中,需添加核酸外切酶进行“消化”,据图分析“消化”的目的是___ ,推测核酸外切酶的作用是___ ,消化完成后,需将反应体系置于95℃条件下持续20min后再进行RCA扩增,目的是___ 。
(3)过程④通过RCA扩增得到长重复单链DNA,与常规PCR相比,RCA缺乏___ 环节,说明RCA扩增过程中所使用的Phi29DNA聚合酶不具有___ 特性。
(4)若检测样品存在具核酸杆菌,经图2中②-④过程得到的长重复单链DNA与___ 特异性结合,导致FAM与BHQ-1距离增大,发出荧光。因为___ ,提高了该检测方法的灵敏度;肠道中含有多种微生物,为保证检测的特异性,在设计锁式探针时需保证检测臂中含nusG基因的特异性序列,同时还需注意无关序列中___ 。
(1)RCA反应体系中需添加多种物质,除图1所示物质外,还应添加的物质是
(2)过程②为锁式探针进行连接以实现环化,该过程中需要的酶是
(3)过程④通过RCA扩增得到长重复单链DNA,与常规PCR相比,RCA缺乏
(4)若检测样品存在具核酸杆菌,经图2中②-④过程得到的长重复单链DNA与
23-24高三下·江苏镇江·开学考试
类题推荐
组卷网是一个信息分享及获取的平台,不能确保所有知识产权权属清晰,如您发现相关试题侵犯您的合法权益,请联系组卷网