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非选择题-解答题 适中0.65 引用2 组卷395
猕猴桃溃疡病是一种严重影响猕猴桃产量的细菌性病害。为获得抗猕猴桃溃疡病的转基因猕猴桃,科研人员以猕猴桃的愈伤组织(对卡那霉素敏感)为转基因受体,通过农杆菌转化法将抗菌肽基因导入猕猴桃。图1表示抗菌肽基因和卡那霉素抗性基因(nptⅡ基因)及其上限制酶酶切位点的分布情况,图2表示Ti质粒及其上限制酶酶切位点的分布情况。回答下列问题:
   
(1)限制酶能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列,并使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的_______断裂。限制酶主要来源于原核生物,但不会切割原核生物自身的DNA分子,推测原因是______。目的基因可随T-DNA整合到目的细胞的染色体DNA上,这体现了_______的生物学变异原理。
(2)若只用EcoRI切割目的基因和Ti质粒,会产生多种连接产物。为筛选出含有目的基因正向连接的重组Ti质粒的菌株,采用含有不同抗生素的平板进行筛选,得到了①②③三类菌落,其生长情况如下表,“+”表示生长,“-”表示不生长。根据表中结果判断,应选择的菌落是_____(填表中序号),菌落②的导入情况是_______
项目
无抗生素+++
卡那霉素--+
氨苄青霉素-++
卡那霉素+氨苄青霉素--+

(3)若既要避免上述多种连接情况的发生,又要使目的基因最终能整合到猕猴桃愈伤组织细胞的染色体DNA上,最好选择限制酶_________对目的基因和Ti质粒进行切割。
23-24高三下·江西·阶段练习
知识点:基因工程的概念及原理DNA重组技术的基本工具基因表达载体的构建目的基因的检测与鉴定 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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如图为某种质粒表达载体简图,小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI、SamI的酶切位点,P为启动子,T为终止子,ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI、SamI在内的多种酶的酶切位点。外源DNA插入到ampR或tctR中会导致相应的基因失活(ampR表示氨苄青霉素抗性基因,tctR表示四环素抗性基因)。回答下列问题:

(1)目的基因主要是指编码蛋白质的基因,也可以是一些_________。在基因工程中使用的载体除质粒外,还有___________、动植物病毒等,它们来源不同,在大小、结构、复制以及插入片段大小上也有很大差别。
(2)一般为避免在构建重组质粒时出现自身环化,该质粒用限制酶切割时应该用________酶进行切割,切割过程中消耗了___________个水分子。目的基因进入受体细胞内,并在受体细胞内维持稳定和表达的过程,称之为_____________________。构建出来的基因表达载体在受体细胞内表达时,RNA聚合酶识别和结合位点是____________
(3)若将此质粒用EcolR I酶切割后,与用EcolR I酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌(大肠杆菌本身不含该质粒),结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。其中,可在含氨苄青霉素的培养基上生存下来的大肠杆菌是____________,能在同时含氨苄青霉素和四环素的培养基上生存的是______________
(4)假如该质粒载体为来自土壤农杆菌的Ti质粒,将其携带的抗虫基因整合到某植物细胞的染色体DNA上,将该细胞通过植物组织培养技术培育成植株后,发现其并无抗虫特性,其可能的原因是__________(答出1种情况即可)
图1为胰岛素基因结构与引物位置示意图,图2为pBR322质粒的结构示意图,图中EcoR I、Sma I、BamH I和HindIII为限制酶,箭头或线段所指位点为对应酶切位点。研究人员欲用此质粒构建胰岛素基因的表达载体,培养能产生人胰岛素的大肠杆菌。请回答下列相关问题:

(1)在构建基因表达载体时,选择____________________分别切割质粒和目的基因,使用两种限制酶切割产生不同的黏性末端,可以防止________________________
(2)若要进行图1中胰岛素基因的扩增常采用__________技术,DNA新链的合成方向是__________,扩增过程中若选择引物3和6,则导致扩增所得的DNA片段_____,故应该选择的引物为__________
(3)成功构建的基因表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等,其中启动子的作用是_________________________________,若利用酵母菌作受体细胞生产胰岛素等分泌蛋白,与大肠杆菌相比,酵母菌的优势有____________________________。若要检测导入酵母菌的胰岛素基因是否成功表达,常用____________________技术。
(4)为筛选出含有重组质粒的菌落,采用含有不同抗生素的平板进行筛选,得到A、B、C三类菌落,其生长情况如下表(“+”代表生长,“-”代表不生长)。根据表中结果判断,应选择的菌落是__________(填表中字母)类,另外两类菌落质粒导入情况分别是________________________________________

菌落类型


平板类型

A

B

C

无抗生素

+

+

+

氨苄青霉素

+

+

-

四环素

+

-

-

氨苄青霉素+四环素

+

-

-


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