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非选择题-解答题 适中0.65 引用1 组卷120
抗除草剂转基因作物的推广可有效减轻除草劳动强度、提高农业生产效率。图1为抗除草剂转基因玉米的技术流程,报告基因GUS只能在导入真核细胞后正确表达,在农杆菌中不能正确表达。报告基因GUS(含有内含子),表达产物能催化无色物质K呈现蓝色。

(1)基因工程的原理是____,基本操作步骤有____
(2)科研人员研发了新的DNA重组方法——无缝克隆In-Fusion技术,如图2所示。In-Fusion酶能够识别任何具有相同15bp末端序列的线性DNA分子并使其形成黏性末端,据此实现目的基因和载体的连接。和传统方法比,无缝克隆In-Fusion技术的优点是____

(3)农杆菌转化愈伤组织时,常用含除草剂的选择培养基筛选转化的愈伤组织。由于愈伤组织表面常残留农杆菌,导致未成功转化的愈伤组织也可能在选择培养基上生长。针对上述现象,可以在选择培养基中同时加____进行筛选,其中周围的培养基____(“显”或“不显”)蓝色的愈伤组织是转化成功的,原因是____
23-24高三下·重庆·阶段练习
知识点:基因工程的概念及原理基因表达载体的构建目的基因的检测与鉴定 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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抗除草剂转基因作物的推广可有效减轻除草劳动强度、提高农业生产效率。图1为抗除草剂转基因玉米的技术流程。

(1)构建含除草剂抗性基因的表达载体,传统的方法是目的基因通过____________酶与载体进行重组。载体上目的基因插入位点的限制酶识别序列____________(填“能”或“不能”)出现在目的基因内部,可通过____________技术在目的基因两侧添加相应限制酶识别序列,以便构建表达载体。
(2)为了减少限制酶识别序列的影响,科研人员研发了新的DNA重组方法:无缝克隆In-Fusion技术(图2),其中In-Fusion酶可以将任何具有相同15bp末端序列的线性DNA分子进行连接,类似同源重组。

①科研人员希望应用以上方法构建含有A和GUS基因的重组DNA分子,首先获得了3种DNA分子如图3,然后混合进行In-Fusion反应。

如果引物2上额外添加的片段对应于GUS基因中加粗的e片段,那么引物1和引物4上额外增加的片段分别对应载体中的片段______________。完成重组反应后,将产物表达载体加入经过______________处理的农杆菌中。
②为筛选成功转入目标重组DNA分子的菌落,可以选取引物______________扩增目的基因并电泳检测。请在图4中画出阳性菌落的电泳结果。
(3)农杆菌转化愈伤组织时,用含______________的选择培养基筛选转化的愈伤组织。转化过程中,愈伤组织表面常残留农杆菌,导致未转化愈伤组织(假阳性)也可能在选择培养基上生长。已知报告基因GUS表达产物能催化无色物质K呈现蓝色,请叙述排除假阳性的原理________
抗除草剂转基因作物的推广可有效减轻除草劳动强度、提高农业生产效率。图1为抗除草剂转基因玉米的技术流程。
   
(1)构建含除草剂抗性基因的表达载体,传统的方法是目的基因通过___________酶与载体进行重组。另外,可通过___________技术在目的基因两侧添加相应限制酶识别序列,以便构建表达载体。
(2)科研人员研发了新的DNA重组方法--无缝克隆In-Fusion技术,如图2所示。In-Fusion酶能够识别任何具有相同15bp末端序列的线性DNA分子并使其形成黏性末端,据此实现目的基因和载体的连接。和传统方法比,无缝克隆In-Fusion技术的优点是________________

   
①应用以上方法构建含有A基因和GUS基因的重组DNA分子时,首先获得了图3中的3种DNA分子,然后混合进行In-Fusion反应。
   
如果引物2上额外添加的片段与GUS基因e片段(图中加粗表示)序列相同,那么引物1和引物4上额外增加的片段分别与载体中的片段(图中加粗表示)__________________________相同。完成重组反应后,将表达载体导入农杆菌中。
②为筛选成功转入目标重组DNA分子的菌落,可以选取引物__________扩增目的基因并电泳检测。
(3)农杆菌转化愈伤组织时,常用含除草剂的选择培养基筛选转化的愈伤组织。由于愈伤组织表面常残留农杆菌,导致未成功转化的愈伤组织也可能在选择培养基上生长。针对上述现象,可以在选择培养基中同时加入_________进行筛选,其中周围的培养基___________(填“显”或“不显”)蓝色的愈伤组织是转化成功的,原因是___________
抗除草剂转基因作物的推广可有效减轻除草劳动强度、提高农业生产效率。图1为抗除草剂转基因玉米的技术流程。

(1)构建含除草剂抗性基因的表达载体,传统的方法是目的基因通过限制酶和______酶与载体进行重组。载体上目的基因插入位点的限制酶识别序列______(填“能”或“不能”)出现在目的基因内部,可通过______技术在目的基因两侧添加相应限制酶识别序列,以便构建表达载体。
(2)为了减少限制酶识别序列的影响,科研人员研发了新的DNA重组方法:无缝克隆In-Fusion技术(图2),其中In-Fusion酶可以将任何具有相同15bp末端序列的线性DNA分子进行连接,类似同源重组。
   
①科研人员希望应用以上方法构建含有A和GUS基因的重组DNA分子,首先获得了3种DNA分子如图3,然后混合进行In-Fusion反应。

如果引物2上额外添加的片段对应于GUS基因中加粗的e片段,那么引物1和引物4上额外增加的片段分别对应载体中的片段______。完成重组反应后,将产物表达载体加入经过______处理的农杆菌中。
②为筛选成功转入目标重组DNA分子的菌落,可以选取引物______扩增目的基因并电泳检测。请在图4中画出阳性菌落的电泳结果______
(3)农杆菌转化愈伤组织时,用含______的选择培养基筛选转化的愈伤组织。转化过程中,愈伤组织表面常残留农杆菌,导致未转化愈伤组织(假阳性)也可能在选择培养基上生长。已知报告基因GUS表达产物能催化无色物质K呈现蓝色,则排除假阳性的原理是:报告基因GUS在______细胞中表达,而在农杆菌中不表达,因此用无色物质K处理上述能正常生长的愈伤组织,假阳性的农杆菌______(出现/不出现)蓝色。

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