Bad基因编码204个氨基酸，是Bel2（B细胞淋巴瘤/白血病-2）家族中相关的促凋亡基因。下图为科研人员获得Bad基因重组细菌的主要流程。请回答：

   

(1)构建Bad基因的克隆时，基因组DNA不能直接用作PCR扩增的模板，原因是真核生物基因组中存在_________序列，在形成mRNA的剪接加工过程中被切除。从细胞中提取总RNA或mRNA，在__________的引导下使用逆转录酶来合成cDNA链。
(2)引物设计的质量是决定图中“②PCR”成败的关键因素。首先从核酸数据库中获得mBad基因的编码序列，然后在引物的_________端加上不同的限制酶切位点序列，第三步为了保证抗原标签与mBad基因表达产物中氨基酸顺序正确，有时需要补加核苷酸，但是注意不能产生_____________，否则会导致蛋End白质分子量的减小。
(3)如图为②PCR过程的程序参数。②过程PCR反应体系配制完成后，先在冰上预冷，等程序设置完毕后再放入PCR仪中，这种冷启动法可以_________。Step1和Step8的主要目的分别是_________。由于Step3引物含有___________，不能和模板完全匹配，所以Step3的温度比Step6要低一点。

   

(4)一般而言，②过程中双链DNA分子越大则电泳迁移速率越____________。除此之外，DNA分子的构型对其电泳迁移速率影响也大：环状超螺旋DNA电泳的速率一般快于线形DNA。从结构的角度分析，原因可能是______________。
(5)研究人员在④过程中应优先选择___________和_____________两种限制酶及E．colDNA连接酶形成重组质粒。
(6)筛选得到的阳性重组子细菌还需要进一步通过DNA测序，原因是____________。