不对称PCR的基本原理是采用不等量的引物，产生大量的单链目标DNA。这两种引物分别称为限制性引物与非限制性引物；其最佳比例一般为1：50~1：100。在PCR反-组卷网

单选题-单选适中0.65 引用2 组卷319

不对称PCR的基本原理是采用不等量的引物，产生大量的单链目标DNA。这两种引物分别称为限制性引物与非限制性引物；其最佳比例一般为1：50~1：100。在PCR反应的早期循环（约20次）中，扩增产物主要是双链DNA，当后期数量较少的限制性引物耗尽后，数量较多的非限制性引物将引导合成大量目标DNA，过程如图所示。下列相关叙述错误的是（）

A．PCR反应缓冲液中一般需添加Mg²⁺，以激活DNA聚合酶

B．复性时引物与模板链3'端的碱基序列通过互补配对结合

C．PCR进行最初20次循环的目的是增加模板DNA的量

D．不对称PCR产生的大量单链DNA是由限制性引物延伸而来

23-24高三上·河北廊坊·期末

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不对称PCR是利用不等量的一对引物来产生大量单链DNA（ssDNA）的方法，如下图所示。不对称PCR中加入的一对引物中含量较少的被称为限制性引物，含量较多的被称为非限制性引物，两者的比例通常为1：100，PCR反应最初的若干次循环中，其扩增产物主要是双链DNA（dsDNA），但当限制性引物消耗完后，就会产生大量的ssDNA．下列相关说法正确的是（）

A．PCR扩增时双链DNA解聚为单链，需要加入DNA解旋酶

B．两种引物与模板链结合，需将温度控制在50℃左右

C．扩增时子链分别沿限制性引物的5'端、非限制性引物的3'端延伸

D．最后大量获得的ssDNA与图中甲链的碱基序列一致

不对称PCR技术是利用不等量的一对引物来产生大量单链DNA（ssDNA）的方法，如图所示。不对称PCR中加入的一对引物中含量较少的被称为限制性引物，含量较多的被称为非限制性引物，两者的比例通常为1/50〜1/100．PCR反应的最初若干次循环中，其扩增产物主要是双链DNA（dsDNA），在限制性引物消耗完后，就会产生大量的ssDNA．下列相关说法正确的是（）

A．两种引物与模板链结合时，需将温度控制在72℃左右

B．PCR扩增时，在DNA解旋酶的作用下双链DNA解聚为单链

C．通过不对称PCR技术最后大量获得的ssDNA的碱基序列与图中甲链的相同

D．PCR扩增时，子链分别沿限制性引物的5′端、非限制性引物的3′端延伸

DNA分子杂交时，常需要大量的单链DNA探针。不对称PCR是一种常见的单链DNA探针制备方法，其原理是反应体系中加入一对数量不相等的引物。在PCR反应的早期10-15个循环中，扩增产物主要是双链DNA，当后期数量较少的限制性引物耗尽后，数量较多的非限制性引物将引导合成大量目标DNA单链。

(1)若A链为所需的DNA分子探针，则非限制性引物应选用引物_____;PCR反应缓冲体系中一般要添加_____以激活耐高温的DNA聚合酶。
(2)进行最初10-15个循环的目的是_____。如果体系中原模板DNA的数量为a，最初10次循环产物为双链，后15次循环产物为单链，则最终获得的单链探针数为_____。因为DNA单链与双链的分子量不同，可通过_____将单链探针DNA分离出来。
(3)为精确控制产物生成量，科学家尝试设计了较长的非限制性引物与较短的限制性引物，在进行一定的循环次数后，适当提高复性温度以避免残留限制性引物与模板结合。高复性温度条件下限制性引物不能结合模板链的原因是_____。

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