非选择题-解答题 适中0.65 引用1 组卷318
某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体,以期快速检测该病毒,图1为其主要技术路线,图2为A基因和载体及有关限制酶的识别序列。基因A为0.98kb。
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回答下列问题:
(1)为构建重组载体,需先设计引物,通过PCR特异性扩增A基因。用于扩增A基因的引物需满足的条件是___________ 、为使PCR产物能被限制酶切割,需在引物的___________ 端(3’或5’)添加相应的限制酶识别序列,由图可知在A基因的两端应添加___________ 和___________ 两种不同限制酶的识别序列。这样就方便后面用这两种限制酶进行酶切,相比用同一种酶,该方法的优点在于___________ (答出2点)。经过这两种酶酶切的A基因和载体连接时,可选用___________ (填“E.coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”)
(2)将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养,随机挑取单菌落(分别编号为1、2、3、4)培养并提取质粒,用(1)中选用的两种限制酶进行酶切,酶切产物经电泳分离,结果如图3,可知___________ 号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。
(3)基因工程常用大肠杆菌作为受体细胞,是因为其具有___________ 等优点。般需用___________ 处理大肠杆菌细胞,以便将重组质粒导入其中。由图1可知,该转基因工程菌中的重组质粒是________ (填“克隆载体”或“表达载体”)
(4)下列说法错误的有哪几项
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名称 | 识别序列及切割位点 | 名称 | 识别序列及切割位点 |
HindⅢ | A↓AGCTTTTCGA↑A | EcoRⅠ | G↓AATTCCTTAA↑G |
PvitⅡ | CAG↓CTGGTC↑GAC | PstⅠ | CTGC↓AGGA↑CGTC |
KpnⅠ | G↓GTACCCCATG↑G | BamHⅠ | G↓GATCCCCTAG↑G |
(1)为构建重组载体,需先设计引物,通过PCR特异性扩增A基因。用于扩增A基因的引物需满足的条件是
(2)将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养,随机挑取单菌落(分别编号为1、2、3、4)培养并提取质粒,用(1)中选用的两种限制酶进行酶切,酶切产物经电泳分离,结果如图3,可知
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(3)基因工程常用大肠杆菌作为受体细胞,是因为其具有
(4)下列说法错误的有哪几项
A.与小鼠骨髓瘤细胞融合前,已免疫的脾细胞需要通过原代培养扩大细胞数量。 |
B.单克隆抗体筛选中,将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交,其目的是通过抗体检测呈阳性来获得分泌所需抗体的杂交瘤细胞。 |
C.进行酶切产物电泳时,加样孔一端朝向正极。 |
D.停止电泳后用0.1%的亚甲基蓝溶液对凝胶进行染色,染料使用后按规定灭菌后再废弃。 |
23-24高三上·浙江·阶段练习
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PHB2蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因,研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列(简称phb2基因),大小为0.9kb(1kb=1000碱基对),利用大肠杆菌表达该蛋白。回答下列问题:
(1)为获取phb2基因,提取该动物肝脏组织的总RNA,再经________ 过程得到cDNA,将其作为PCR反应的模板,并设计一对特异性引物来扩增目的基因。
(2)图1为所用载体图谱示意图,在利用PCR扩增phb2基因时,为了使PCR产物能被限制酶切割,以便构建基因表达载体,可以考虑在引物的________ (填“3'”端或“5'端”)添加限制酶识别序列。而在扩增的phb2基因两端分别引入两种不同限制酶的识别序列是常用方法,对于酶切的phb2基因和载体来说选择两种限制酶切比只用一种限制酶切好的原因是:____________________________________ 。经过这两种酶酶切的phb2基因和载体进行连接时,可选用________ (填“E.coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”)。
相关限制酶的识别序列及切割位点
注:箭头表示切割位点
(3)将符合要求的基因表达载体导入工程菌后,可用________ 技术检测PHB2蛋白是否合成,通过提取、分离和纯化,从发酵液中获得该蛋白。为防止PHB2蛋白在工程菌细胞中被降解,在发酵过程中应选用________ 缺陷型工程菌作为受体细胞,且在发酵结束后的纯化过程中应添加蛋白酶抑制剂。
(4)将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养,随机挑取菌落(分别编号为1、2、3、4)培养并提取质粒,用(2)中选用的两种限制酶进行酶切,酶切产物经电分离,结果如图2,________ 号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。
注:M为指示分子大小的标准参照物;小于0.2kb的DNA分子条带未出现在图中
(1)为获取phb2基因,提取该动物肝脏组织的总RNA,再经
(2)图1为所用载体图谱示意图,在利用PCR扩增phb2基因时,为了使PCR产物能被限制酶切割,以便构建基因表达载体,可以考虑在引物的
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相关限制酶的识别序列及切割位点
名称 | 识别序列及切割位点 | 名称 | 识别序列及切割位点 |
HindⅢ | A↓AGCTT TTCGA↑A | EcoRⅠ | G↓AATTC CTTAA↑G |
Pvit2 | CAG↓CTG GTC↑GAC | PstⅠ | CTGC↓AG GA↑CGTC |
KpnⅠ | G↓GTACC CCATG↑G | BamHⅠ | G↓GATCC CCTAG↑G |
(3)将符合要求的基因表达载体导入工程菌后,可用
(4)将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养,随机挑取菌落(分别编号为1、2、3、4)培养并提取质粒,用(2)中选用的两种限制酶进行酶切,酶切产物经电分离,结果如图2,
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2023/7/21/5290bcb5-1fb3-4bf3-b2bd-610ab2cc10d8.png?resizew=296)
注:M为指示分子大小的标准参照物;小于0.2kb的DNA分子条带未出现在图中
PHB2蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因,研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列(简称pHb2基因),大小为1.5kb(1kb=1000碱基对),利用大肠杆菌表达该蛋白。如图为所用载体图谱示意图,图中限制酶的识别序列及切割位点见下表。回答下列问题:
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(1)为获取pHb2基因,提取该动物肝脏组织的总RNA,再经______ 过程得到DNA,将其作为PCR反应的模板,并设计一对特异性引物来扩增目的基因。
(2)启动子是一段有特殊结构的DNA片段,能被______ 识别并结合,驱动基因的______ ;
(3)为使pHb2基因(该基因序列不含图1中限制酶的识别序列)与载体正确连接,需在扩增的pHb2基因两端分别引入下列哪两种不同限制酶的识别序列______(填选项)
(4)经过这两种酶酶切的pHb2基因和载体进行连接时,可选用______ (填“E.coli DNA连接酶”或“T4DNA连接酶”)。
相关限制酶的识别序列及切割位点(注:箭头表示切割位点)
(5)转化前需用CaCl2处理大肠杆菌细胞,使其处于______ 的生理状态,以提高转化效率。
(6)将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养,随机挑取菌落(分别编号为1、2、3、4)培养并提取质粒,用(2)中选用的两种限制酶进行酶切,酶切产物经电泳分离,结果如图2,______ 号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。
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(1)为获取pHb2基因,提取该动物肝脏组织的总RNA,再经
(2)启动子是一段有特殊结构的DNA片段,能被
(3)为使pHb2基因(该基因序列不含图1中限制酶的识别序列)与载体正确连接,需在扩增的pHb2基因两端分别引入下列哪两种不同限制酶的识别序列______(填选项)
A.EcoRⅠ和PvitⅡ | B.PvitⅡ和KpnⅠ | C.EcoRⅠ和KpnⅠ |
相关限制酶的识别序列及切割位点(注:箭头表示切割位点)
名称 | HindⅢ | PvitⅡ | KpnⅠ | EcoRⅠ | PstⅠ | BamHⅠ |
识别序列及切割位点 | A↓AGCTT TTCGA↑A | GAG↓CTG GTC↑GAG | G↓GTACC CCATG↑G | G↓AATTC CTTAA↑G | CTGC↓AG GA↑CGTC | G↓GATCC CCTAG↑G |
(5)转化前需用CaCl2处理大肠杆菌细胞,使其处于
(6)将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养,随机挑取菌落(分别编号为1、2、3、4)培养并提取质粒,用(2)中选用的两种限制酶进行酶切,酶切产物经电泳分离,结果如图2,
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2022/6/19/a4ded7c7-875e-4200-a731-99643ca40f48.png?resizew=296)
PHB2蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因,研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列(简称PHB2基因),大小为0.9kb(1kb=1000碱基对),利用大肠杆菌表达该蛋白。回答下列问题:
(1)为获取PHB2基因,提取该动物肝脏组织的总RNA,经_______ 过程得到cDNA,将其作为PCR反应的模板,并设计一对特异性引物来扩增目的基因。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2023/6/21/3264394267385856/3265773507215360/STEM/a0e124bf4bc24bcb8719eca59258bbb9.png?resizew=210)
相关限制酶的识别序列及切割位点
注:箭头表示切割位点
(2)图1为所用载体图谱示意图,图中限制酶的识别序列及切割位点见上表。为使PHB2基因(该基因序列不含图1中限制酶的识别序列)与载体正确连接,在扩增的PHB2基因两端分别引入______ 和______ 两种不同限制酶的识别序列,用这两种限制性内切酶切割外源DNA片段和载体,在______ (填“E.coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”)的作用下将PHB2基因片段连接到载体上。
(3)转化前需用______ 处理大肠杆菌细胞,使其处于______ 的生理状态,以提高转化效率。
(4)将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养,随机挑取菌落(分别编号为1、2、3、4)培养并提取质粒,用(2)中选用的两种限制酶进行酶切,酶切产物经电泳分离,结果如图2,______ 号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2023/6/21/3264394267385856/3265773507215360/STEM/0684dbb108db4adeb52c6b46e4e4993b.png?resizew=204)
注:M为指示分子大小的标准参照物;小于0.2kb的DNA分子条带未出现在图中
(5)将纯化得到的PHB2蛋白以一定浓度添加到人宫颈癌细胞培养液中,培养24小时后,检测处于细胞周期(示意图见图3)不同时期的细胞数量,统计结果如图4。分析该蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖可能的原因是将细胞阻滞在细胞周期的______ (填“G₁”或“S”或“G₂/M”)期。
(1)为获取PHB2基因,提取该动物肝脏组织的总RNA,经
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2023/6/21/3264394267385856/3265773507215360/STEM/a0e124bf4bc24bcb8719eca59258bbb9.png?resizew=210)
相关限制酶的识别序列及切割位点
名称 | 识别序列及切割位点 | 名称 | 识别序列及切割位点 |
HindⅢ | A↓AGCTTTTCGA↑A | EcoRⅠ | G↓AATTCCTTAA↑G |
PvitⅡ | CAG↓CTGGTC↑GAC | PstⅠ | CTGC↓AGGA↑CGTC |
KpnⅠ | G↓GTACCCCATG↑G | BamHⅠ | G↓GATCCCCTAG↑G |
(2)图1为所用载体图谱示意图,图中限制酶的识别序列及切割位点见上表。为使PHB2基因(该基因序列不含图1中限制酶的识别序列)与载体正确连接,在扩增的PHB2基因两端分别引入
(3)转化前需用
(4)将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养,随机挑取菌落(分别编号为1、2、3、4)培养并提取质粒,用(2)中选用的两种限制酶进行酶切,酶切产物经电泳分离,结果如图2,
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2023/6/21/3264394267385856/3265773507215360/STEM/0684dbb108db4adeb52c6b46e4e4993b.png?resizew=204)
注:M为指示分子大小的标准参照物;小于0.2kb的DNA分子条带未出现在图中
(5)将纯化得到的PHB2蛋白以一定浓度添加到人宫颈癌细胞培养液中,培养24小时后,检测处于细胞周期(示意图见图3)不同时期的细胞数量,统计结果如图4。分析该蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖可能的原因是将细胞阻滞在细胞周期的
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