生物工程相关题目如下：
（一）中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H以糖蜜（甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室发酵生产PHA等新型可降解材料，期望提高甘蔗的整体利用价值。工艺流程如图所示。

   

(1)为提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液体培养基中将蔗糖作为_____________，并不断提高其浓度，经多次传代培养以获得目标菌株。培养过程中定期取样并用________方法进行菌落计数评估菌株增殖状况。此外，选育优良菌株的方法还有_______________等。（答出两种方法即可）
(2)基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培养基浓度设为60g/L，pH为10，菌株H可正常持续发酵60d以上。该系统不需要灭菌的原因是_______________。（答出两点即可）
(3)研究人员在工厂进行扩大培养，在适宜的营养物浓度、温度、pH条件下发酵，结果发现发酵液中菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中_______________可能是高密度培养的限制因素。
(4)菌株H还能通过分解餐厨垃圾（主要含蛋白质、淀粉、油脂等）来生产PHA，说明其能分泌_______________。
（二）35s启动子是广泛应用于转基因植物中的重要组件之一。一个35s启动子包括1个A区和2个B区。图甲表示35s启动子及其附近区域分布的限制酶识别位点，已知不同限制酶切割后得到的黏性末端各不相同。研究人员拟构建含有两个35s启动子串联的转基因苜蓿。图乙表示待转入第二个35s启动子的重组质粒的构成组件及其上的限制酶识别位点。
（注：图乙中的卡那霉素抗性基因可以在原核生物中表达）

   

(5)在构建基因表达载体时，启动子的作用是_______________。
(6)利用PCR技术扩增35s启动子过程中，每次循环中温度最低的步骤是_______________。根据限制酶识别位点，为了让第二个35s启动子准确串联在待转入的重组质粒上，应选择_______________限制酶切割甲图DNA片段。
(7)为了筛选出正确串联了两个35s启动子的新重组质粒菌落，研究人员用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到①②③三类菌落，其生长状况如下表（+代表生长，-表示不生长）。根据表中结果判断，应选择的菌落是_______________（填①、②或③）类，另外两类菌落质粒导入情况分是_______________、_______________。若新获得的转基因苜蓿中目的基因的表达量大幅增加，可以说明串联两个35s启动子能_______________。

平板类型	①	②	③
无抗生素	+	+	+
卡那霉素	·	，	+
氨苄青霉素	．	+	+
卡那霉素+氨苄青霉素	-	-	-