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非选择题-实验题 较难0.4 引用2 组卷247
移植异体心脏时,异体心脏中的树突状细胞容易引起患者体内强烈的免疫排斥反应(如图)。

(1)在免疫系统中,树突状细胞属于________________(编号选填),B细胞是______________(编号选填)。免疫反应中C细胞能分泌____________
①T淋巴细胞 ②B淋巴细胞 ③抗原呈递细胞④细胞毒性T细胞⑤辅助性T细胞
(2)关于图6免疫排斥反应的分析,正确的是(          
A.引发免疫排斥的主要信息来自树突状细胞上的MHC
B.树突状细胞上被识别的MHC和心肌细胞上的不同
C.树突状细胞和心肌细胞中的遗传信息不同
D.刺激A细胞的信号会逐渐消失,免疫系统重归稳态

未成熟的树突状细胞培养至第6天时才能激活免疫排斥,且树突状细胞中Dectin-1基因过量表达能抑制MHC的表达。为减轻免疫排斥反应,研究人员利用Dectin-1基因(甲)和带有绿色荧光蛋白基因(GFP)的噬菌体载体(乙)构建重组DNA(如图)。各限制酶的酶切位点分别是BglⅡ(-A↓GATCT-)、EcoRI(-G↓AATTC-)和Sau3AI(-↓GATC-)。

(3)构建表达载体时,为提高重组率,最适合的酶切组合是(          
A.用EcoRI切割目的基因和P1噬菌体载体
B.用BglⅡ和EcoRI切割目的基因和P1噬菌体载体
C.用BglⅡ和Sau3AI切割目的基因和P1噬菌体载体
D.用EcoRI和Sau3AI切割目的基因和P1噬菌体载体

(4)在制备受体细胞时,最为合理的操作是__________(编号选填)。
①提取小鼠骨髓中的细胞②提取小鼠心脏中的细胞③原代培养获得多种细胞       ④ 原代培养获得树突状细胞⑤传代培养获得多种细胞⑥ 传代培养获得树突状细胞
(5)细胞培养至第6天时,受体细胞发生了(       
A.分裂B.分化C.生长D.凋亡

(6)分别对含重组DNA、未导入DNA分子的两种受体细胞进行检测, “+”表示检测物表达,“-”表示检测物不表达,表中①、②、③处的检测结果分别是_________________________(选填“+”/“-”) 。

检测物

细胞A

细胞B

第1天

第3天

第6天

第1天

第3天

第6天

绿色荧光蛋白

+

+

+



MHC






(7)除了含重组DNA的树突状细胞、未导入DNA分子的树突状细胞两组实验外,还应设置的实验组是______________________,目的是_________________________________________
23-24高三上·上海长宁·阶段练习
知识点:细胞免疫基因表达载体的构建目的基因的检测与鉴定动物细胞培养技术 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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非霍奇金淋巴瘤是一种原发于淋巴组织的血液系统恶性肿瘤,其细胞表面高表达CD19蛋白。CAR-T(嵌合抗原受体T细胞)疗法是利用基因工程的方法使T细胞表面表达能够靶向特定抗原的受体(CAR),改造后的T细胞被称为CAR-T,可以识别并攻击带有特定抗原的肿瘤细胞,同时激活机体自身免疫从而达到抗肿瘤的效果。请回答下列问题:
(1)目前制备CAR-T细胞大多是采用慢病毒感染的方式使T细胞表达CAR。
①获取CAR基因(实质为抗CD19蛋白的抗体基因):将抗CD19蛋白的抗体基因作为PCR反应的模板,并依据_____设计一对特异性引物来扩增该基因。
②构建基因表达载体:图1为所用载体示意图,表格为限制酶的识别序列及切割位点。为使目的基因与载体正确连接,在扩增目的基因时,应在其一对引物的_____端分别引入
_____两种不同限制酶的识别序列。在目的基因和载体连接时,可选用_____(选填“E。coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”)。
③将目的基因导入受体细胞:将重组质粒通过_____技术导入到T细胞。
④重组质粒的筛选与鉴定:将转化后的T细胞置于含_____的培养基上进行培养,进一步通过流式细胞术验证CAR-T细胞的构建是否成功。


(2)采用病毒作为递送载体存在随机插入的安全隐患,CRISPR/Cas9技术作为第三代基因编辑工具(图2),sgRNA可引导Cas9蛋白在特定位点进行切割来完成基因的编辑。科学家利用该技术制备的CAR-T细胞,在非霍奇金淋巴瘤临床前的治疗中取得理想效果。其操作原理如图3所示。
①sgRNA能与靶基因特异性识别、结合的原理是_____,基因编辑工具中对基因进行剪切的是_____
②肿瘤细胞表面的PD-L1蛋白和T细胞表面的PD-1受体结合,发出免疫抑制信号,实现免疫逃逸。该研究团队利用CRISPR/Cas9技术切割T细胞中PD-1基因的同时导入靶向PD-1基因的同源重组序列,利用同源重组修复的原理将_____重组在PD-1基因内部,制备了非病毒定点整合的CAR-T细胞,如图3。
③综合上述信息分析,与慢病毒制备的CAR-T细胞相比,该方案制备的CAR-T细胞在非霍奇金淋巴瘤的治疗中的优点有:可以_____插入抗CD19蛋白的抗体基因,降低随机插入的安全隐患,提高CAR-T细胞的安全性;可以使PD-1基因突变,降低肿瘤细胞____ 的可能性,提高CAR-T细胞的有效性。
科研团队通过转基因获得了一种大肠杆菌工程菌,成为监测残留在生物组织或环境中的四环素水平的“报警器”,其监测原理如图1所示,天然大肠杆菌不具备图1中所示基因。

(1)在上述研究中,需导入天然大肠杆菌的目的基因有________。(选填序号)(多选)
①四环素合成相关基因 ②GFP 基因 ③TetR基因 ④RNA 聚合酶基因
(2)基因工程中最核心的步骤是________,其目的是________
(3)据图1,当环境中不含四环素时,该大肠杆菌工程菌________(选填“能发出”“不发出”)荧光;环境中四环素水平越高,该种大肠杆菌工程菌的荧光________(选填“增强”“减弱”“不变”)。试概述该种四环素检测方法的原理:________
(4)图2是2个DNA片段、质粒及其上的限制性内切核酸酶的识别序列的分布情况;其中质粒上的Ampr代表青霉素抗性基因。表为相关限制性内切核酸酶的识别序列与切割位点。

限制酶EcoRIXbaISpeIBamHI
识别序列及切割位点

则,BamHI酶切后产生的黏性末端为________。若要拼接DNA片段1和2,结合图2和上表中信息,在特定工具酶作用下能成功拼接的位点处碱基序列为________。(选填下表中序号)
编号
拼接位点处的碱基序列


(5)研究人员设计了一个同时含DNA片段1和2的重组质粒的拼接方案,结合图表信息,你认为最终建构成功的重组质粒示意图最合理的是__________

(6)下列操作能够证明重组质粒和大肠杆菌工程菌建构成功的方法及现象有         
A.通过琼脂糖凝胶电泳实验证明重组质粒的大小符合预期
B.大肠杆菌工程菌不能在含有青霉素的培养基上生长
C.用显微镜观察重组质粒上的外源 DNA 片段的碱基序列
D.四环素浓度变化能引起大肠杆菌工程菌荧光强度的相应改变

(7)为提高对环境中四环素水平监测的有效性,研究人员将GFP的第65位丝氨酸突变成苏氨酸后,增强了绿色荧光稳定性和强度。该项技术属于_________
①细胞工程   ②蛋白质工程   ③基因的定点突变
人类P基因启动子上游的调控序列中含有UFB蛋白(由肝细胞合成)的结合位点,该位点结合UFB蛋白后,能诱导P基因的表达,从而诱发一种肝细胞疾病。科研人员为确定UFB蛋白结合位点的具体位置,进行了构建重组载体和荧光检测等相关研究。相关信息如图所示。

限制酶识别序列及切割位点:NotI:5'GC↓GGCCGC3'   XhoI:5'C↓TCGAG3'   EcoRI:5'G↓AATTC3'   MunI:5'C↓AATTG3'
(1)为构建重组载体,需先设计引物,通过PCR特异性扩增___片段,为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达,结合图1和图2分析,需要在引物的___(填“3'端”或“5'端”)添加限制酶的识别序列,其中在F1或F2的末端添加Xhol限制酶的识别序列,在引物R的末端添加___限制酶识别序列。
(2)将扩增的片段分别插入用___限制酶和___限制酶处理的载体中,构建其与荧光蛋白基因融合的载体,以便进一步转化和荧光检测。
(3)将构建的表达载体导入含UFB蛋白受体细胞继续培养,进行荧光检测。根据研究结果推测,UFB蛋白结合的具体位点位于引物F1与F2在调控序列上所对应序列之间的区段上。为了进一步验证该推测,研究者依据相关序列制备了野生型和缺失特定碱基序列的突变型探针,分别与肝细胞核蛋白提取物(UFB)混合,实验分组及结果如图3。

据实验结果分析推测:
①肝细胞核蛋白提取物中含有的UFB与探针中的___结合,阻滞了探针的迁移。
②100倍非标记的野生型探针所起的作用是___
③推测第5组结果产生的原因是___
(4)根据以上研究尝试提出预防或治疗该肝脏疾病的思路___(答出两点即可)。

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