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非选择题-解答题 适中0.65 引用2 组卷242
水稻矮缩病毒能使得水稻出现矮缩症状。某科研团队发现水稻矮缩病毒的功能与其合成的P蛋白有关。为了探究P蛋白的作用机理，该团队决定构建转P基因水稻。回答下列问题：
(1)构建重组DNA分子。P基因序列较短且序列已知，适合用___法进行制备。获取P基因后可与农杆菌的___相连接，连接过程的效率与下列哪几项因素有关?___。
A．P基因的浓度
B．质粒的浓度
C．黏性末端情况
D．DNA连接酶的活性
(2)用农杆菌侵染愈伤组织。选择野生水稻的叶片作为___，消毒后诱导其经历___过程形成愈伤组织。加入含___的农杆菌，待转化完成后加入一定量植物细胞不敏感的抗生素，其目的是___。
(3)植物组织培养得到完整植株。将愈伤组织进行___培养以分散成单个细胞，克隆培养后，筛选含___的植物细胞株，经过培养得到转基因植株。愈伤组织的细胞容易受到培养条件和诱变因素的影响产生突变，原因是其处于___的状态。
(4)推测转P基因水稻___（填“更难”或“更易”）出现矮缩症状。进一步研究表明，P蛋白能与水稻细胞的Os蛋白互作，导致水稻合成的乙烯变多，进而引发一系列症状。下列措施中能够降低水稻矮缩病毒带来影响的有哪几项?___。
A．提高乙烯含量
B．敲除水稻的Os基因
C．过量表达P蛋白
D．乙烯合成抑制剂处理水稻
23-24高三上·浙江杭州·期中
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知识点：植物组织的培养及基本过程基因表达载体的构建目的基因的检测与鉴定植物细胞工程的实际应用 答案解析 【答案】很抱歉，登录后才可免费查看答案和解析！
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谷氨酸脱羧酶在植物生长发育和逆境胁迫中具有重要作用，OsGAD2是水稻中一种能编码谷氨酸脱羧酶的基因。南昌大学科研团队用CRISPR/Cas9技术获得了几个OsGAD2基因敲除的纯合突变体，发现敲除了OsGAD2的突变体水稻在株高、粒长和粒重上都有显著提高。回答下列问题：
(1)科研人员首先将OsGAD2基因编码区的片段和CRISPR/Cas9载体连接，得到重组载体，这个过程需要用到的酶是_____________。导入受体细胞后，载体上的OsGAD2基因片段可以转录出一段引导RNA序列（sgRNA），sgRNA可以和受体细胞中OsGAD2基因的相应位置（靶点）发生_____________，从而引导Cas9蛋白特异性诱导靶点发生碱基随机突变。若突变后的0sGAD2基因表达出的蛋白质比原来更短，可能原因是_____________。突变后OsGAD2基因往往会失去原有功能，所以重组载体也可以叫“OsGAD2基因敲除载体”，该载体的部分结构细节如下图所示。

(2)用农杆菌转化法将OsGAD2基因敲除载体导入愈伤组织细胞，将转化后的愈伤组织转接培养基上进行培养。为筛选出含有OsGAD2基因敲除载体的愈伤组织细胞，培养基中需要加入______________________。同时，加入抗生素还可以起到_____________作用。
(3)要检测是否成功诱变，最好选取下图中的引物_____________（填编号），以受体细胞染色体DNA为模板进行PCR，对扩增出的产物进行DNA分子测序。PCR每个循环有3个步骤，其中_____________这个步骤需要将温度降到50℃左右，其目的是_____________
研究人员欲将嗜盐微生物中的某种抗盐基因导入单子叶水稻，从而培育抗盐水稻新品种，回答下列问题：
(1)获取抗盐基因。若抗盐基因的序列已知，为获得大量该基因，可将其连接到________上，通过大肠杆菌培养实现扩增；也可通过PCR技术进行扩增，扩增过程中两种特异性引物会与靠近模板链________端的碱基序列配对结合，为减少反应中因引物和模板不完全配对而产生的非特异条带数量，下列哪一项措施最有效？________（A．增加模板数量B．延长热变性时间C．延长延伸时间D．提高复性温度），若抗盐基因的序列未知，可将该种嗜盐微生物的全部DNA提取、切割后与载体连接，再导入受体菌的群体中储存，该群体称为________，然后从中筛选得到所需抗盐基因。
(2)制备原生质体。植物细胞壁对外源基因的导入造成一定阻碍，因此可采用________酶去除而得到原生质体。在制备叶片原生质体的酶混合液中，一般含较高浓度的甘露醇，可使细胞处于微弱的________状态，从而有利于完整原生质体的释放，制得的原生质体呈________形。
(3)将抗盐基因导入原生质体。可通过________方法，直接将抗盐基因导入原生质体的细胞核也可将抗盐基因通过载体导入到处于________的农杆菌，再进一步完成转化。农杆菌主要侵染双子叶植物，双子叶植物受伤时，其伤口处产生的酚类化合物会吸引农杆菌并激活Ti质粒相关基因的表达，因此采用________的方法可提高转化效率。导入后的原生质体经培养重新长出细胞壁，则在继续培养的过程中需对培养基进行的调整是________，以利于细胞的继续分裂。
(4)检测筛选转基因植株。可利用带有标记的抗盐基因片段作为________，与从转基因植株提取的DNA进行杂交，杂交前需通过处理使提取的DNA________；也可通过含有________的培养基，根据生长状况初步筛选出抗盐植株。
(5)抗盐性状的优化。研究人员基于已有的研究成果推测，将上述抗盐蛋白中的第38位氨基酸甲改变为氨基酸乙可能会显著提高其作用效果，他们因此通过新的氨基酸序列合成了新的基因序列，并最终获得了效果更优的抗盐蛋白，该过程是通过________工程来实现的。
赖氨酸是人体细胞不能合成的必需氨基酸。科学家把某种必需氨基酸含量多的蛋白质编码基因（R）导入玉米中，使玉米中赖氨酸的含量提高30%。回答下列问题。

(1)利用PCR技术增扩R基因时，需要在一定的缓冲液中才能进行，其中需要加入_________酶和激活该酶所需的_________。为了特异性扩增R基因序列，需根据_________设计特异性引物。A、B、C、D、E、F、G、H八种单链DNA片段中应选取_________作为引物。第5次循环后，可扩增得到与两条引物之间长度相等的DNA片段（含R基因）共_________个。
(2)图中强启动子的作用是_________。在构建基因表达载体时，若为了避免R基因和质粒的自连或反向连接，提高重组效率，应该选择的限制酶是_________。
(3)随着转化方法的突破，农杆菌侵染玉米这种单子叶植物也取得了成功。科研人员从新鲜的玉米叶片上取下的圆形小片与农杆菌共培养，当农杆菌侵染玉米细胞后，能将___________上的T-DNA转移到被侵染的细胞，并且将其整合到_________。筛选这种转化细胞后，利用组织培养技术，经过__________形成愈伤组织，将愈伤组织接种到含有___________的培养基上，诱导其形成胚状体，再生成植株。
(4)对转基因再生玉米植株进行分子水平检测时发现，有些植株虽有R基因，但几乎没有赖氨酸含量多的蛋白质，造成该现象的原因可能有_________。

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