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非选择题-解答题 较易0.85 引用1 组卷184
某水体中的污染物M具有较强的致癌作用,为了检测水体中化合物M的含量,科研人员将图1中的可被化合物M激活的启动子插入到图2质粒的P区构建重组质粒,并将重组质粒导入大肠杆菌获得能够指示M含量的工程菌。回答下列问题:
   
(1)利用PCR对图1中的启动子进行扩增时需要向缓冲液中加入启动子序列、4种脱氧核苷酸、__________________________和2种引物,加入引物的作用是________________
(2)图1中箭头的方向表示启动子转录的方向,为使启动子正确插入到质粒并驱动SPP基因转录,利用PCR技术扩增启动子时,分别在启动子A端和B端添加限制酶__________________________的酶切位点。
(3)为了检查重组DNA是否构建成功,可使用(2)中的两种限制酶分别对质粒和表达载体进行切割,并对酶切产物进行凝胶电泳。若切割质粒后电泳得到_____________条DNA带、切割基因表达载体后电泳得到_____________条DNA带、则说明表达载体构建成功。
(4)将基因表达载体导入大肠杆菌前,一般先用Ca2+处理大肠杆菌,其目的是___________。若质粒中的SPP基因表达产物可使大肠杆菌等细菌裂解,请写出利用工程菌检测水体是否被化合物M污染的实验思路,并预期实验结果及结论:________________________
23-24高三上·河北石家庄·阶段练习
知识点:PCR扩增的原理与过程基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞验证性实验与探究性实验 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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大肠杆菌是水体中常见的微生物,经改造的大肠杆菌可用来检测制药厂排出的污水中某化合物X(一种遗传毒性杂质,可损伤细胞DNA,具有致癌可能)的含量。
(1)大肠杆菌在含有伊红一亚甲蓝的牛肉膏蛋白胨培养基中生长,菌落呈深紫色并有金属光泽,据此可用于检测污染水体中大肠杆菌的数量。上述培养基是否属于选择培养基____,说明理由______
(2)图1中甲、乙、丙、丁是从微生物中分离到的可被化合物X激活的4种毒性响应基因启动子(箭头表示转录方向);图2质粒中SPP基因的表达产物可使大肠杆菌等细菌裂解。将4种启动子分别插入质粒的P区,以构建表达载体,导入大肠杆菌可获得对化合物X敏感的工程菌。

①经PCR反应体系扩增启动子片段时,DNA聚合酶只能从核苷酸链的___(选填“5'端”或“3'端”)开始延伸DNA链。除引物外,PCR反应体系中还包含缓冲液、模板DNA、_________等成分。
②为使4种启动子正确插入到质粒上,利用PCR技术扩增启动子时,需分别在4种启动子A端和B端添加限制酶__________的酶切位点。
③为初步检测表达载体是否构建成功,可用上述两种限制酶对质粒和4种表达载体进行切割,然后对酶切产物进行凝胶电泳,检测结果如图3所示。由此可初步判定表达载体的构建_____。(填“成功”或“不成功”)
④作为受体细胞的大肠杆菌能在___的培养液中生长。
(3)将获得的工程菌甲、乙、丙、丁和对照菌分别培养在细菌培养液中,2小时后在培养液中加入化合物X继续培养,检测细菌的密度,结果如图4所示。

①实验中的对照菌是_____
②实验中对细菌密度的统计方法应为_____
③据图可知,4种工程菌均启动了对化合物X的响应,判断的依据是_____

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