植物细胞壁中含大量不能被猪消化的多聚糖类物质，如半纤维素多聚糖、果胶质（富含半乳糖醛酸的多聚糖）等。研究人员通过现代生物技术培育出转多聚糖酶基因（manA）猪，主要流程如图所示，图中neo为标记基因，回答下列问题：
      
(1)图中获取目的基因采用的限制酶是BamHI和BglⅡ，但是处理后的目的基因后并不能避免自身环化，原因是________。处理质粒应采用的限制酶是________。
(2)图中通过PCR技术扩增目的基因的前提是_________，以用于制备PCR扩增需要的引物，引物的作用是________。基因工程的核心环节是图中的________（填标号）。
(3)如果要一次性获得更多的转基因猪，可在囊胚期对早期胚胎进行胚胎分割，操作时要注意_________。获得的转基因猪中的manA主要在_________中进行表达。