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非选择题-解答题 较难0.4 引用1 组卷259
生物工程,长期高血糖可引发血管细胞衰老。科研人员为研究S蛋白在因高血糖引发的血管细胞衰老中的作用,以腺病毒为载体将编码S蛋白的S基因导入血管细胞,实现S蛋白在血管细胞中的大量表达。腺病毒的遗传物质为DNA,其复制需要E1、E2、E3基因共同完成。为将S基因导入腺病毒,科研人员首先构建了含S基因的重组质粒,过程如图1所示。图中PacI、EcoRI、BamHI、PmeI表示相关限制酶的酶切位点。
          
(1)科研人员将S基因用______(具体名称)酶切后,用DNA连接酶连入质粒I,得到重组质粒I(图1甲所示),导入大肠肝菌。用添加______的培养基筛选,对所长出的单菌落提取质粒,通过PCR的方法可鉴定重组质粒I是否插入了S基因。
(2)用PrmeI酶切重组质粒I获得DNA片段。将此DNA片段与质粒I(图1乙所示)共同转化BJ细菌。在BJ细菌体内某些酶的作用下,含同源序列的DNA片段(图1甲、乙所示的左臂、右臂)可以发生类似____________的过程,产生重组质粒IT(图1丙所示)。
A.基因突变B.交叉互换C.自由组合D.染色体数目变异
(3)将含S基因的重组质粒II,用___________(具体名称)酶切后,获得改造后的腺病毒DNA.将其导入A细胞(A细胞含有E3基因,可表达E3蛋白),如图2所示。腺病毒DNA在A细胞内能够________从而产生大量重组腺病毒。
(4)综合上述信息,从生物安全性角度分析重组腺病毒载体的优点:_______________
(5)用含S基因的重组腺病毒分别感染正常人及糖尿病患者的血管细胞,使S蛋白在血管细胞中大量表达。提取正常人、糖尿病患者及两者转入S基因后的血管细胞的蛋白,用抗原抗体特异性杂交方法检测I蛋白(一种能促进细胞衰老的蛋白)的表达量,结果如图3所示。实验结果显示2组血管细胞中I蛋白表达量最高,推测S蛋白对高血糖引发的血管细胞衰老的作用及机制是____________________
   
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知识点:基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定基因工程的操作程序综合 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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长期高血糖可引发血管细胞衰老。科研人员为研究S蛋白在因高血糖引发的血管细胞衰老中的作用,以腺病毒为载体将编码S蛋白的S基因导入血管细胞,实现S蛋白在血管细胞中的大量表达。

(1)腺病毒的遗传物质为DNA,其复制需要E1、E2、E3基因共同完成。为将S基因导入腺病毒,科研人员首先构建了含S基因的重组质粒,过程如图1所示。
①科研人员将S基因用________________________________酶切后,用DNA连接酶连入质粒I,得到重组质粒Ⅰ(图1甲所示),导入用CaCl2处理制备的细菌。用添加抗生素的培养基筛选,对所长出的单菌落提取质粒,通过________________的方法可鉴定重组质粒Ⅰ是否插入了S基因。
②用PmeI酶切重组质粒I获得DNA片段。将此DNA片段与质粒Ⅱ(图1乙所示)共同转化BJ细菌。在BJ细菌体内某些酶的作用下,含同源序列的DNA片段(图1甲、乙所示的左臂、右臂)可以发生同源重组,产生重组质粒Ⅱ(图1丙所示)。使用添加________________的培养基可筛选得到________________的菌落。
(2)将含S基因的重组质粒Ⅱ,用________________酶切后,获得改造后的腺病毒DNA。将其导入A细胞(A细胞含有E3基因,可表达E3蛋白),如图2所示。腺病毒DNA在A细胞内能够________________,从而产生大量重组腺病毒,腺病毒进入宿主细胞后不整合到宿主细胞染色体上。
(3)综合上述信息,从生物安全性角度分析重组腺病毒载体的优点:________________________________
长期高血糖可引发血管细胞衰老。科研人员为研究S蛋白在因高血糖引发的血管细胞衰老中的作用,以腺病毒为载体将编码S蛋白的S基因导入血管细胞,实现S蛋白在血管细胞中的大量表达。腺病毒的遗传物质为DNA,其复制需要E1、E2、E3基因共同完成。为将S基因导入腺病毒,科研人员首先构建了含S基因的重组质粒,过程如图1所示。


(1)科研人员将S基因用_____________限制酶切割后,用DNA连接酶连入质粒Ⅰ,得到重组质粒Ⅰ(图1甲所示),导入用CaCl2处理制备的_____________细菌。用添加抗生素的培养基筛选,对所长出的单菌落提取质粒,通过分子杂交的方法可鉴定重组质粒Ⅰ是否插入了S基因。
(2)用Pme I酶切重组质粒Ⅰ获得DNA片段。将此DNA片段与质粒Ⅱ(图1乙所示)共同转化为重组质粒Ⅱ(图1丙所示)。使用添加_____________的培养基可筛选得到成功导入重组质粒Ⅱ的菌落。
(3)将含S基因的重组质粒Ⅱ,用Pac I酶切后,获得改造后的腺病毒DNA。将其导入A细胞(A细胞含有E3基因,可表达E3蛋白),如图2所示。腺病毒DNA在A细胞内能够_____________,从而产生大量重组腺病毒,腺病毒进入宿主细胞后不整合到宿主细胞染色体上。用酶切时不能破坏启动子,原因是启动子是_____________识别和结合的部位,有了它才能驱动基因转录出mRNA。
(4)综合上述信息,从生物安全性角度分析重组腺病毒载体的优点:__________________________(写出1点)。
期高血糖可引发血管细胞衰老。科研人员为研究S蛋白在因高血糖引发的血管细胞衰老中的作用,以腺病毒为载体将编码S蛋白的S基因导入血管细胞,实现S蛋白在血管细胞中的大量表达。腺病毒的遗传物质为DNA,其复制需要E1、E2、E3基因共同完成。为将S基因导入腺病毒,科研人员首先构建了含S基因的重组质粒,过程如图1,含S基因重组腺病毒的制作过程如图2。

(1)科研人员将S基因先用____________(填限制酶的名称)酶切后,再用DNA连接酶连入质粒I,得到重组质粒Ⅰ(图1甲所示),导入细菌后。为筛选含有重组质粒I的细菌,除了营养成分外,培养基还需添加____________
A.卡那霉素                    B.氨苄霉素                    C.DNA连接酶                    D.琼脂
(2)在上述培养基中长出的单菌落提取质粒,无法确定是否含有S基因,原因是____________。如要进一步鉴定重组质粒I是否含有S基因,下列方法可选用的是____________
①测定重组质粒Ⅰ的长度②测定重组质粒Ⅰ碱基序列③放在青霉素培养基进行筛选④测定重组质粒I的元素
(3)重组质粒Ⅰ长度为3.5kb(千碱基对),质粒Ⅱ长度为5.4kb,用限制酶切重组质粒Ⅰ获得DNA片段,利用pmeI切割将此DNA片段与质粒Ⅱ(图1乙所示)重组产生重组质粒Ⅱ,重组质粒Ⅱ的长度可能为____________,原因是____________
(4)图2中,将含S基因的重组质粒II,用PacI酶切后,获得改造后的腺病毒DNA,将其导入A细胞的目的是____________,A细胞的基因必须要含有____________基因。
(5)综合上述信息,从生物安全性角度分析重组腺病毒载体的优点:_____________

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