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非选择题-解答题 适中0.65 引用2 组卷344
人血清白蛋白(HSA)是由肝脏细胞合成的,具有重要的医用价值,原本只能从血清中提取,现利用基因工程的方法生产HAS。请结合相关知识回答下列问题。

(图甲为获取的含HAS基因的DNA片段及酶切位点:图乙是三种限制酶的识别序列:图丙为质粒结构示意图)
(1)科研人员利用人肝细胞中的_______________构建出_______________文库,通过该方法合成的DNA含量较少,可通过PCR进行扩增获取较多的DNA分子,根据该基因的序列(5'CTAGGTCGAAATTC…TCTCCAACGATCGG3'),应选择_______________作为PCR的引物。
A.引物Ⅰ是5′-CTAGGTCGAAATTC-3′,引物Ⅱ是5′-CCGATCGTTGGAGA-3'
B.引物Ⅰ是5′-CTAGGTCGAAATTC-3′,引物Ⅱ是5′-TCTCCAACGATCGG-3'
C.引物Ⅰ是5′-GATCCAGCTTTAAG-3',引物Ⅱ是5'-AGAGGTTGCTAGCC-3
D.引物Ⅰ是5′-GATCCAGCTTTAAG-3',引物Ⅱ是5′-CCGATCGTTGGAGA-3'
为使HSA基因能与质粒正确连接根据图甲、乙、丙,应选择的限制酶_______________切割目的基因。
(2)PCR扩增结束后需要对PCR产物进行检测,常采用电泳的方法。PCR产物加到加样孔中,加样孔一端应朝向电极的_______________极。电泳一段时间后进行检测,若电泳带有_______________条,且与DNAMarker对比,产物大小正确,表明PCR扩增成功。
(3)目的基因与质粒连接后可以导入到不同的受体细胞中进行表达。若导入到原核生物大肠杆菌中,可用CaCl2处理大肠杆菌,使之成为_______________细胞,有利于重组质粒的导入。但由于原核细胞中缺少_______________等细胞器,不能对表达产物进行加工,可能会影响蛋白质的功能。若将重组质粒导入到真核细胞,如小鼠细胞中,则可避免上述问题的产生。现利用小鼠乳腺作为生物反应器生产该蛋白,可将重组质粒通过_______________法导入小鼠的_______________细胞中,然后将转化的细胞进行培养,由于无法进行全体外胚胎培养,_______________成为胚胎工程中获得转基因小鼠的唯一方法。利用_______________技术检测小鼠乳腺分泌物,可以判断目的基因是否表达。
23-24高三上·浙江·开学考试
知识点:PCR扩增的原理与过程基因表达载体的构建目的基因的检测与鉴定胚胎移植技术 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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人血清白蛋白(HSA)主要在肝脏中合成,具有重要的医用价值。为制备大量的HSA,以基因工程技术获取重组HSA的两条途径如图1所示;图2中的甲为获取的含有目的基因(HSA基因)的DNA片段,Sau3A Ⅰ、EcoR Ⅰ、BamHⅠ为三种限制酶,图中箭头所指为三种限制酶的酶切位点;图乙是三种限制酶的识别序列与酶切位点示意图;图丙是Ti质粒结构示意图。回答下列问题:


(1)从人体细胞中直接提取的HSA基因,导入到大肠杆菌细胞中不能表达,原因可能是______________。为了获得能在大肠杆菌细胞中表达的HSA基因,可从人体的_______________细胞中提取mRNA,通过反转录获得cDNA(双链),再利用PCR进行扩增,该过程需向反应体系中加入__________________________、4种脱氧核苷酸、引物和Mg2,若扩增后得到了32个HSA基因,则该过程共需要______________个引物。
(2)构建基因表达载体时,不能选择限制酶Sau3A Ⅰ切割目的基因,原因是____________________________,为了防止目的基因与质粒间的任意连接,应选择限制酶Sau3A Ⅰ、EcoR Ⅰ切割质粒,选择限制酶___________________充分切割目的基因,质粒上抗生素抗性基因的作用是____________________
(3)将目的基因导入大肠杆菌时,常用________处理细胞。为了检测水稻胚乳细胞中是否合成了HSA蛋白,可用__________方法;若胚乳细胞中含有HSA基因,但是检测不到HSA蛋白,原因可能是_________________________________
人血清白蛋白(HSA)主要由肝细胞产生,在临床上的需求量大,由于其来源有限和有生物污染的风险,重组人血清白蛋白(rHSA),成为其重要的替代品。科研人员将HSA基因转入酵母菌细胞,获得了重组人血清白蛋白。如图为酵母菌基因改造以及工业化发酵生产rHSA的过程示意图,其中I、II、III、IV是四种不同的限制酶,具各自识别的酶切位点如表所示。

限制酶

识别序列及切割位点


(1)若要将HSA基因正确插入质粒中,最好选择限制酶____进行共同切割,重组基因表达载体中的启动子的作用是____
(2)为筛选出含重组质粒的菌落,采用含有不同抗生素的平板进行筛选,得到甲、乙、丙三类菌落,三类菌落形态相同,生长情况如下图所示,则成功导入目的基因的重组质粒的菌落类型是____类,未导入质粒的菌落类型是____类;(填字母类型)

(3)科研人员提取人肝细胞中的mRNA,并通过反转录法构建了HSA基因,该基因其中一条链的序列为(5'-CCGATCGTTGGAGA…GAATTTCGACCTAG-3'),若通过PCR进行扩增,已知其中一种引物I是5'-CTAGGTCGAAATTC-3',则另一种引物的序列为____(答出6个碱基序列即可)。
(4)PCR扩增结束后需要对PCR产物进行检测,常采用电泳的方法。电泳一段时间后进行检测,若电泳带有____条,且与DNAMarker对比,产物大小正确,表明PCR扩增成功。
(5)有人提议将乳腺反应器改成膀胱反应器,请分析利用膀胱反应器比乳腺反应器产量高的原因____(答出两点即可)。

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