非选择题-解答题 较难0.4 引用1 组卷230
表皮生长因子受体(EGFR)是原癌基因表达的产物。EGFR 由胞外区、跨膜区、胞内区三部分组成, EGFR与其配体结合后能引起一系列基因活化,导致肿瘤细胞增殖。DNEGFR 基因是EGFR基因缺失了胞内区的突变基因,科研人员研究了DNEGFR基因表达和定位情况,流程如下图, 请回答:
(1)从人结肠癌组织中提取总RNA,经_________ 过程合成cDNA。根据人EGFR 前体cDNA的序列设计合成引物,扩增得到 DNEGFRcDNA,其表达产物因缺失胞内区而没有信号转导功能,但其能够与_________ 竞争结合配体,从而达到抑制肿瘤细胞增殖的作用。
(2)RT-PCR 过程所用引物如下,据上图可知,构建重组质粒时使用的两种限制酶是_________ 。研究人员将DNEGFR 和y融合在一起的目的是_________ 。
(3)本实验将EGFP 序列融合在 DNEGFR序列的下游而不是上游,原因是若将 EGFP 序列放在上游,______________ 。
①DNEGFR基因表达的前体蛋白的信号肽段不能发挥定位作用
②会影响配体与胞外区的结合
③会影响 EGFP 基因的表达
④会影响质粒的复制
(4)向感受态细菌悬浮液中加入重组质粒混匀。扩大培养后取菌液涂布于卡那霉素筛选LB平板上,37℃正向放置0.5h,正向放置0.5h的目的是_________ ,然后倒置平皿37℃培养12~16h。挑选菌落分别扩增、鉴定,待鉴定正确后大量提取质粒。
(5)将重组质粒pEGFP-N1-DNEGFR包裹到主要由_________ 构成的脂质体内,与动物细胞发生融合,重组质粒最终发生转化。72h后再利用光谱激光扫描共聚焦显微镜观测结果见下图A,检测表明融合蛋白成功锚定于_________ ,细胞质存在少量荧光的原因可能是_________ 。为了让结果更加严谨,设置B、C两组对照,推测 B组的处理方式是_________ 。
(1)从人结肠癌组织中提取总RNA,经
(2)RT-PCR 过程所用引物如下,据上图可知,构建重组质粒时使用的两种限制酶是
(3)本实验将EGFP 序列融合在 DNEGFR序列的下游而不是上游,原因是若将 EGFP 序列放在上游,
①DNEGFR基因表达的前体蛋白的信号肽段不能发挥定位作用
②会影响配体与胞外区的结合
③会影响 EGFP 基因的表达
④会影响质粒的复制
(4)向感受态细菌悬浮液中加入重组质粒混匀。扩大培养后取菌液涂布于卡那霉素筛选LB平板上,37℃正向放置0.5h,正向放置0.5h的目的是
(5)将重组质粒pEGFP-N1-DNEGFR包裹到主要由
23-24高三上·江苏南通·开学考试
类题推荐
亮氨酸脱氢酶是一类氧化还原酶,在临床生化诊断上有重要作用。有研究表明,在亮氨酸脱氢酶基因原有启动子(PHpaII)之后加上信号肽(引导新合成的蛋白质向分泌通路转移的一段肽链)序列,可提高亮氨酸脱氢酶产量。科研人员进一步研究双启动子(PHpaII、PamyQ)及双启动子后再分别添加3种信号肽序列对亮氨酸脱氢酶产量的影响,主要实验流程如下图。请回答下列问题。(1)启动子的功能是_____ 。组成信号肽的基本单位是_____ 。
(2)过程①中,PCR 反应体系中添加的dNTP的功能有_____ ,添加的一对引物是_____ 。
P1: 5'-GGGAATCATATGGGCGGCGTTCTGTTTCTG-3'
P2: 5'-CCGATTAAGCTTGGCGGCGTTCTGCATCTG-3'
P3: 5'-CGCGGATCCATAAGGCAGTAAAGAGGCTTTTG-3'
P4: 5'-GCCGGATCCACAAGGCAGTATTTACTGCCTT-3'
(3)过程②中的 DNA 连接酶催化相邻核苷酸之间的3′一羟基与5′一磷酸间形成__________________ ,PCR 循环中, TaqDNA 聚合酶的作用是催化_______________ ,进行扩增时,反应的温度和时间需根据具体情况进行设定,下列选项中______ 的设定与扩增片段的长度有关。(填标号)
①变性温度 ②退火温度 ③延伸温度 ④变性时间 ⑤退火时间 ⑥延伸时间
(4)过程②中,启动子 PamyQ能与质粒1连接的分子基础是_____ 。将重组质粒1导入枯草杆菌前先用Ca²⁺处理枯草杆菌, 其主要目的是_____ 。转化后的枯草杆菌一般要用稀释涂布平板法接种到添加_____ 的培养基上进行筛选。
(5)科研人员将质粒1、重组质粒1和3种重组质粒2分别导入枯草杆菌得到甲~戊5 种重组枯草杆菌,进行发酵后提取上清液中的亮氨酸脱氢酶,酶活力测定结果如下表。
①结果表明,______ 最有利于提高亮氨酸脱氢酶产量。
②双启动子后添加信号肽序列影响酶的表达或分泌量的原因可能有_______ 。
a.信号肽序列影响了亮氨酸脱氢酶基因的表达
b.信号肽序列影响了启动子转录成相应的 mRNA 序列
c.信号肽序列表达产物使亮氨酸脱氢酶分泌路径发生改变
(2)过程①中,PCR 反应体系中添加的dNTP的功能有
P1: 5'-GGGAATCATATGGGCGGCGTTCTGTTTCTG-3'
P2: 5'-CCGATTAAGCTTGGCGGCGTTCTGCATCTG-3'
P3: 5'-CGCGGATCCATAAGGCAGTAAAGAGGCTTTTG-3'
P4: 5'-GCCGGATCCACAAGGCAGTATTTACTGCCTT-3'
(3)过程②中的 DNA 连接酶催化相邻核苷酸之间的3′一羟基与5′一磷酸间形成
①变性温度 ②退火温度 ③延伸温度 ④变性时间 ⑤退火时间 ⑥延伸时间
(4)过程②中,启动子 PamyQ能与质粒1连接的分子基础是
(5)科研人员将质粒1、重组质粒1和3种重组质粒2分别导入枯草杆菌得到甲~戊5 种重组枯草杆菌,进行发酵后提取上清液中的亮氨酸脱氢酶,酶活力测定结果如下表。
重组菌 | 甲 | 乙 | 丙 | 丁 | 戊 |
酶活力/U·mL⁻¹ | 10.11 | 31.24 | 0.44 | 6.49 | 21.76 |
②双启动子后添加信号肽序列影响酶的表达或分泌量的原因可能有
a.信号肽序列影响了亮氨酸脱氢酶基因的表达
b.信号肽序列影响了启动子转录成相应的 mRNA 序列
c.信号肽序列表达产物使亮氨酸脱氢酶分泌路径发生改变
组卷网是一个信息分享及获取的平台,不能确保所有知识产权权属清晰,如您发现相关试题侵犯您的合法权益,请联系组卷网