非选择题-解答题 较难0.4 引用1 组卷77
λ噬菌体的遗传物质是双链线状DNA,其DNA两端的5'端是由12个碱基组成的互补黏性末端(cos位点),常作为基因工程的载体,转化频率比质粒高1 000倍以上。下图是置换型λ噬菌体基因组的结构和连接过程的示意图,下表是若干种限制酶及其识别的序列,箭头处表示酶切位点。填充片段用于置换目的基因片段,其两端含有多个限制酶酶切位点。回答下列问题:
(1)λ噬菌体特异性感染大肠杆菌后,其DNA会迅速形成闭环结构,能形成闭环结构的原因是________ 。XbaⅠ识别的碱基序列是_________ 。过程②利用______ 酶补平黏性末端,加入的核苷酸是________ 。
(2)置换载体用XbaⅠ切割并用脱氧核苷酸补平后,外源目的基因用表中的限制酶_________________ 处理,再用腺嘌呤脱氧核苷酸、鸟嘌呤脱氧核苷酸补平,经DNA连接酶处理后可将目的基因替换到λ噬菌体上。与不补平黏性末端相比,上述操作方法的优点是可以避免_______________ (答出两点即可),从而提高目的基因与载体相连接的效率。
(3)表面展示技术是通过重组DNA技术,将外源蛋白与细胞表面的蛋白质组装成融合蛋白,从而可展示在细胞表面。凝集素与脂多糖结合,可发生凝集反应。研究人员将特异性识别蓝细菌表面脂多糖的凝集素(一种蛋白质),通过表面展示技术定位至芽孢杆菌的质膜上,这一技术实现了_____________ ,应用于修复水华现象。
限制酶 | BamHI | EcoRI | Mob I | Acl I |
识别的序列 | G↓GATCC | G↓AATTC | ↓GATC | AA↓CGTT |
(2)置换载体用XbaⅠ切割并用脱氧核苷酸补平后,外源目的基因用表中的限制酶
(3)表面展示技术是通过重组DNA技术,将外源蛋白与细胞表面的蛋白质组装成融合蛋白,从而可展示在细胞表面。凝集素与脂多糖结合,可发生凝集反应。研究人员将特异性识别蓝细菌表面脂多糖的凝集素(一种蛋白质),通过表面展示技术定位至芽孢杆菌的质膜上,这一技术实现了
23-24高三上·湖南·开学考试
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胡萝卜抗冻蛋白基因(afp)是人类发现的第一个植物抗冻蛋白基因,对于植物抗冻基因工程具有非常重要的意义。下表为几种限制酶的识别序列及酶切位点,下图表示构建afp基因表达载体的过程,其中PUCm-T、PBI121为人工改造后的质粒,LacZ基因可用于重组质粒的筛选。
(1)通过PCR获得afp时,需选用的引物为__________ ,至少经过_________ 次循环即可获得afp。
(2)PCR产物往往在引物端含有多个A聚合的尾,而PUCm-T尾端由多个T聚合,所以在构建克隆载体时不需要用限制酶处理afp和PUCm-T,理由是__________ 。
(3)LacZ基因编码的β-半乳糖苷酶可催化乳糖的水解,培养基中添加物质IPTG可诱导LacZ基因的表达,将培养基中的白色物质X-gal转化为蓝色物质。据图分析,成功导入克隆载体的大肠杆菌菌落呈___________ (填“白色”或“蓝色”),理由是__________ 。
(4)提取大肠杆菌中的克隆载体后,先用EcoRI处理克隆载体,再将两端形成的黏性末端补平,补平后再用XbaI处理,得到了一端平末端,一端黏性末端的afp,同时选用_________ (从表中选择)处理PBI121质粒,然后用DNA连接酶将PBI121与alp进行连接,构成afp基因表达载体。在此过程中,使afp的两端形成不同的末端的意义是_________ 。
限制酶 | 识别序列 |
BamH I | 5'-G↓GATCC- 3' |
EcoR I | 5'-G↓AATTC- 3' |
Pst I | 5'-C↓TGCAG- 3' |
Xba I | 5'-T↓CTAGA- 3' |
Sma I | 5'- CCC↓ GGG- 3' |
(2)PCR产物往往在引物端含有多个A聚合的尾,而PUCm-T尾端由多个T聚合,所以在构建克隆载体时不需要用限制酶处理afp和PUCm-T,理由是
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(4)提取大肠杆菌中的克隆载体后,先用EcoRI处理克隆载体,再将两端形成的黏性末端补平,补平后再用XbaI处理,得到了一端平末端,一端黏性末端的afp,同时选用
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