人的血清蛋白（HSA）具有重要的医用价值，研究人员欲用乳腺生物反应器来大量生产HSA。下图所示为HSA基因片段和人工构建的大肠杆菌质粒pBR322，图中Ampr-组卷网

非选择题-解答题适中0.65 引用3 组卷268

人的血清蛋白（HSA）具有重要的医用价值，研究人员欲用乳腺生物反应器来大量生产HSA。下图所示为HSA基因片段和人工构建的大肠杆菌质粒pBR322，图中Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，Neo^r表示新霉素抗性基因，箭头表示切割形成末端完全不同的4种限制酶的切割位点。请据图回答问题：

(1)人工构建pBR322质粒除了含特定限制酶切割位点、标记基因、复制原点外，还必须有__________（答出两点）等，
(2)若选用牛作为受体动物，可将人血清蛋白基因与__________等调控组件重组在一起，通过__________方法将目的基因导入牛的受精卵中，然后使其发育成转基因牛。
(3)据图分析，在构建基因表达载体时，选择__________作为切割质粒和目的基因的限制酶可提高目的基因和载体的正确连接效率，其原因是____________________。
(4)为了排除普通受体细胞（未导入质粒）、空质粒受体细胞（导入pBR322质粒而非重组质粒）的干扰，目的基因导入后，进行了进一步筛选：制备甲、乙两种培养基，甲培养基含新霉素，乙培养基含新霉素和氨苄青霉素，含重组质粒的受体细胞在甲培养基上__________（填“能”或“不能”）生存，在乙培养基上__________（填“能”或“不能”）生存。
(5)据下图分析，利用PCR技术获取HSA基因时，应选择甲、乙、丙、丁四种引物中的__________，需扩增__________次后得到HSA目的基因。

22-23高二下·山东淄博·阶段练习

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知识点：PCR扩增的原理与过程基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定答案解析【答案】很抱歉，登录后才可免费查看答案和解析！

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人的血清蛋白（HSA）具有重要的医用价值，研究人员欲用乳腺生物反应器来大量生产HSA。图1为HSA基因片段和人工构建的大肠杆菌质粒pBR322，其中Amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，Neo^R表示新霉素抗性基因，箭头表示切割形成末端完全不同的4种限制酶的切割位点。HSA只能从血浆中制备，以基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的三条途径如图2所示。请回答下列问题：

(1)人工构建pBR322质粒除了含特定限制酶切割位点、标记基因、复制原点外，还必须有_____（答出两点）等。
(2)据图1分析，在构建基因表达载体时，选择限制酶_____切割质粒和目的基因，可提高目的基因和载体的正确连接率。双酶切法的优点之一是避免质粒与目的基因之间的_____。
(3)为了排除普通受体细胞（未导入质粒）、空质粒受体细胞（导入pBR322质粒而非重组质粒）的干扰，目的基因导入后进行了进一步筛选：制备甲、乙两种培养基，甲培养基中有新霉素，乙培养基中有氨苄青霉素，含重组质粒的受体细胞在甲培养基上_____（从“能”“不能”中选填）生存，在乙培养基上_____（从“能”“不能”中选填）生存。
(4)将农杆菌与水稻受体细胞混合后共同培养，旨在让Ti质粒的_____进入水稻受体细胞。常用_____标记的目的基因片段作为探针检测目的基因是否整合到受体细胞的染色体DNA上。为检测目的基因的表达情况，可提取受体细胞的蛋白质，用_____进行杂交实验。
(5)人体合成的初始HSA多肽，需要经过加工形成正确的空间结构才能有活性。与图2中途径Ⅱ相比，选择途径I获取rHSA的优势是水稻具有_____系统，能对初始HSA进行高效加工。为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与_____的生物学功能一致。
(6)科学家培养出一种转基因羊，其膀胱上皮细胞可以合成人血清白蛋白并分泌到尿液中。其培育方法中将重组质粒通过_____法导入山羊的_____细胞。与乳腺生物反应器相比，膀胱生物反应器不受_____限制，受体来源更广泛。

人的血清蛋白（HSA）具有重要的医用价值，研究人员欲用大肠杆菌来大量生产HSA。下图所示为HSA基因片段和质粒pBR322，图中Amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，Neo^R表示新霉素抗性基因，箭头表示能产生完全不同末端的4种限制酶的切割位点。请据图回答下列问题：

(1)质粒的化学本质是________。大肠杆菌质粒pBR322可以作为多种目的基因的载体，原因是__________。
(2)据图分析，在构建基因表达载体时，选择________作为切割质粒和目的基因的限制酶可提高目的基因和载体的正确连接效率，其原因是________。
(3)用上述酶切构建好基因表达载体后导入用________处理的大肠杆菌，可能出现已转化和未转化的大肠杆菌，为了筛选已转化的大肠杆菌，需要将大肠杆菌在分别含有________的培养基中培养，若___________，表明其是导入了基因表达载体的菌体。
(4)图中大肠杆菌质粒还需要进一步改造，需要加入的序列是____________和____________。如果HSA基因反向接入会通过影响________过程而影响表达。

通过基因工程技术能大量生产人生长激素。下图所示为人工构建的大肠杆菌质粒pBR322，是由三种质粒经复杂重组过程构建而来。其上含氨苄青霉素抗性基因（Amp′）、四环素抗性基因（Tet′）。表为相关限制酶的识别序列和酶切位点。请回答下列问题：

限制酶	PstⅠ	EcoRⅠ	HindⅢ
识别序列及切割点	↓ CTGCAG GACGTC ↑	↓ GAATTC CTTAAG ↑	↓ AAGCTT TTCGAA ↑

(1)人工构建pBR322质粒除了需要限制酶切割位点、标记基因、复制原点外，还必须有______等结构。
(2)生产生长激素需从人垂体细胞中提取mRNA，逆转录得到DNA，常用______特异性快速扩增目的基因。
(3)为了构建重组质粒，采用PstⅠ、EcoRⅠ处理目的基因和质粒，与只用PstⅠ处理相比，这样操作的优势是：______。将构建的重组质粒导入大肠杆菌后，为了排除普通大肠杆菌（无pBR322质粒）、空质粒大肠杆菌（含pBR322质粒但没有目的基因）的干扰，进行了进一步检测。配制甲、乙两种培养基，甲培养基含四环素，乙培养基含四环素和氨苄青霉素。含目的基因的大肠杆菌在甲培养基上______（填“能”或“不能”）生存，在乙培养基上______（填“能”或“不能”）生存。
(4)导入受体细胞后，常用__________技术检测生长激素在大肠杆菌中是否成功表达。
(5)基因工程的应用十分广阔，可用转基因牛制作乳腺生物反应器，从乳汁中提取药物。则该操作过程中选择的受体细胞是______，原因是__________。

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