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非选择题-解答题 较难0.4 引用2 组卷356
某种类型的白血病由蛋白P引发,蛋白UBC可使P被蛋白酶识别并降解,药物A可通过影响这一过程对该病起到治疗作用。为探索药物A治疗该病的机理,需构建近组载体以获得融合蛋白FLAG-P和FIAG-P△。P△是缺失特定氨基酸序列的P,FLAG是一种短肽,连接在P或P△的氨基端,使融合蛋白能与含有FLAG抗体的介质结合,但不影响p或P△的功能。
(1)为构建重组载体,需先设计引物,通过PCR特异性扩增P基因。用于扩增P基因的引物需满足的条件是__________。为使PCR产物能被限制酶切割,需在引物上添加相应的限制酶识别序列,该限制酶识别序列应添加在引物的____________端(填“3'”或“5'”)。
(2)PCR扩增得到的P基因经酶切连接插入载体后,与编码FLAG的序列形成一个融合基因,如图甲所示,其中“ATGTGCA”为P基因编码链起始序列。将该重组载体导入细胞后,融合基因转录出的mRNA序列正确,翻译出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正确,但P基因对应的氨基酸序列与P不同。据图甲分析,出现该问题的原因是_______________。修改扩增P基因时使用的带有EcoRⅠ识别序列的引物来解决该问题,具体修改方案是_______________
   
(3)融合蛋白表达成功后,将FLAG-P、FLAG-P△、药物A和UBC按照图乙中的组合方式分成5组。各组样品混匀后分别流经含FLAG抗体的介质,分离出与介质结合的物质并用UBC抗体检测,检测结果如图丙所示。已知FLAG-P和FLAG-P△不能降解UBC,由①②③组结果的差异推测,药物A的作用是_______;由________组的差异推测,P△中缺失的特定序列的作用是___________
   
(4)根据以上结果推测,药物A治疗该病的机理可能是_________
22-23高三上·江苏南通·阶段练习
知识点:DNA重组技术的基本工具基因表达载体的构建目的基因的检测与鉴定基因工程的操作程序综合 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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某种类型的白血病由蛋白P引发,蛋白UBC可与蛋白P结合,使其被蛋白酶识别并降解,药物A可通过影响这一过程对该病起到治疗作用。为探索药物A治疗该病的机理,需构建基因表达载体以获得融合蛋白FLAG-P和FLAG-P△。P△是缺失特定氨基酸序列的P,FLAG是一种短肽,连接在P或P△的氨基端,使融合蛋白能与含有FLAG抗体的介质结合,但不影响P或P△的功能。

(1)α链的3'端在_______(填写“左侧”或“右侧”),A、B、C、D四个短核苷酸链,可作为PCR复制过程中的引物对的是_______
(2)PCR扩增得到的P基因(PCR时已在引物两端添加限制酶识别序列)经酶切连接插入载体后,与编码FLAG的序列形成一个融合基因,如图乙所示,其中“ATGTGCA”为P基因编码链起始序列,ATG对应其正常转录mRNA中的AUG(起始密码子)。
①PCR扩增P基因时需将限制酶的识别序列添加在引物的_______(填“3'端”“5'端”或“3'端或5'端”)。
②将该重组载体导入细胞后,融合基因转录出的mRNA序列正确,翻译出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正确,P基因对应的氨基酸序列与蛋白P不同,据图分析,解决这一问题可采取的方法是_______

(3)融合蛋白表达成功后,将FLAG-P、FLAG-P△、药物A和蛋白UBC按照图丙中的组合方式分成5组。各组样品混匀后分别流经含FLAG抗体的介质,分离出与介质结合的物质,用蛋白UBC抗体检测,检测结果如图丁所示。已知FLAG-P和FLAG-P△不能降解UBC.

通过_______组的结果,可以分析缺失序列△的作用,该序列缺失造成的影响是_______;由实验结果可知,药物A的作用机理是_______
某种类型的白血病由蛋白P引发,蛋白UBC可使P被蛋白酶识别并降解,药物A可通过影响这一过程对该病起到治疗作用。为探索药物A治疗该病的机理,需构建重组载体以获得融合蛋白FLAG-P和FLAG-P△。P△是缺失特定氨基酸序列的P,FLAG是一种短肽,连接在P或P△的氨基端,使融合蛋白能与含有FLAG抗体的介质结合,但不影响P或P△的功能。
   
(1)α链的3’端在________(填写“左侧”或“右侧”),A、B、C、D四个短核苷酸链,可作为PCR复制过程中的引物对的是________假设最初有m个供体DNA,若错选了另一对做引物,在进行n轮复制之后,理论上最终得到的DNA个数是_________,消耗的引物个数是________
(2)PCR扩增得到的P基因(PCR时已在引物两端添加限制酶识别序列)经酶切连接插入载体后,与编码FLAG的序列形成一个融合基因,如图乙所示,其中“ATGTGCA”为P基因编码链起始序列,ATG对应其正常转录mRNA中的AUG(起始密码子)。
①根据图像可知PCR得到P基因时,与β链配对的引物________(填写“5’端”或“3’端”)相连的限制酶序列是_________________(按3’→5’填写碱基顺序)。
②将该重组载体导入细胞后,融合基因转录出的mRNA序列正确,翻译出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正确,P基因对应的氨基酸序列与蛋白P不同,据图分析,不同的原因是_______________________
   
(3)融合蛋白表达成功后,将FLAG-P、FLAG-P△、药物A和UBC按照图丙中的组合方式分成5组。各组样品混匀后分别流经含FLAG抗体的介质,分离出与介质结合的物质并用UBC抗体检测,检测结果如图丁所示。已知FLAG-P和FLAG-P△不能降解UBC。
   
图丁的①②③④⑤,其中______________(填写序号)存在与FLAG抗体介质结合的物质。其中②③中的物质与FLAG抗体和UBC抗体均能结合,两者之间的差异说明_________________________。通过___________组,可以分析缺失序列△的作用,该序列缺失造成的影响是___________________
Ⅰ、某种类型的白血病由蛋白P引发,蛋白UBC可使P被蛋白酶识别并降解,药物A可通过影响这一过程对该病起到治疗作用。为探索药物A治疗该病的机理,需构建重组载体以获得融合蛋白FLAG-P和FLAG-P∆。P∆是缺失特定氨基酸序列的P,FLAG是一种短肽,连接在P或P∆的氨基端,使融合蛋白能与含有FLAG抗体的介质结合,但不影响P或P∆的功能。
(1)为构建重组载体,需先通过PCR特异性扩增P基因,故用于扩增P基因的引物需满足的条件是______
(2)PCR扩增得到的P基因经酶切连接插入载体后,与编码FLAG的序列形成一个融合基因,如图甲所示,其中“ATGTGCA”为P基因编码链起始序列。图中融合基因转录出的mRNA序列正确,翻译出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正确,但P基因对应的氨基酸序列与P不同。据图甲分析,出现该问题的原因是______

   
(3)融合蛋白表达成功后,将FLAG-P、FLAG-P∆、药物A和UBC按照图乙中的组合方式分成5组。各组样品混匀后分别流经含FLAG抗体的介质,分离出与介质结合的物质并用UBC抗体检测,检测结果如图丙所示。已知FLAG-P和FLAG-P∆不能降解UBC,由①②③组结果的差异推测,药物A的作用是______;由②④组或③⑤组的差异推测,P∆中缺失的特定序列的作用是__________________

   
Ⅱ、FLAG抗体是一种单克隆抗体,其制备过程大致如下。
(4)请完善部分实验步骤:
①分别向多只同龄小鼠皮下注射经处理过的__________________,在实现初次免疫后,定期进行多次相同的免疫处理,并在最后一次免疫检测后获取小鼠血清,然后检测血清中FLAG抗体含量;
②从上述小鼠脾脏中分离出__________________细胞,与骨髓瘤细胞融合,置于96孔细胞培养板上,在适宜条件下培养;
③融合一定时间后,将杂交瘤细胞放入96孔酶标板中,检测其上清液中抗体水平。对抗体水平达标的孔中细胞克隆化培养;
④取克隆株注射至小鼠__________________进行培养,一段时间后,获得FLAG抗体。
(5)步骤①中检测血清中FLAG抗体含量的目的是__________________;在步骤②中96孔细胞培养板和在步骤③中96孔酶标板进行细胞培养的目的分别是____________________________________

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