非选择题-解答题 适中0.65 引用1 组卷511
为扩大可耕地面积，增加粮食产量，沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注。科学家应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系，为解决我国粮食问题做出了重要贡献。若测得某耐盐基因（RST1）编码链首端到末端（其中一条链）的序列为5'-ATCTACGCGCTCATCCG ...(省略3n个核苷酸序列）…CGCAGCAATGAGTAGCG-3'。下图1为构建重组质粒的过程示意图， BamHⅠ、BclⅠ、SmaⅠ、Sau3AⅠ为限制酶(四种酶的识别序列详见表)。请回答下列问题：
(1)为获取更多RST1基因，可通过PCR扩增，在反应体系中加入引物的作用是_____ 。某同学设计了如下六种PCR引物，其中可选用的引物是_____ (选填序号)。
① 5'-GACTACTCGCGCATCTA-3' ② 5'-ATCTACGCGCTCATCCG-3'③ 5'-GCGATGAGTAACGACGC-3' ④ 5'-CGCTACTCATTGCTGCG-3'⑤ 5'-TAGATGCGCGAGTAGGC-3' ⑥ 5'-CGCAGCAATGAGTAGCG-3'
(2)若PCR反应未得到任何扩增产物，主要原因有_____ （选填序号）。
①退火温度过高 ②Taq酶失活 ③设计的引物过短 ④变性温度过低 ⑤模板受到污染 ⑥Mg2＋浓度过低
(3)为将图中质粒A和RST1基因正确连接构建重组质粒B，设计RST1基因的引物时，在两种引物的5'端分别添加_____ 酶的识别序列，选用_____ 酶切割质粒A，酶切后的载体和目的基因片段通过_____ 酶作用后获得重组质粒。为了筛选出转入了重组质粒的受体细胞，应首先在筛选平板培养基添加_____ ，再将平板上长出的菌落通过影印接种法（盖章）接种到添加_____ 的平板培养基上继续培养观察。
(4)从平板上长出的菌落若提取重组质粒B利用Sau3AI进行酶切，最多可以得到_____ 种大小不同的DNA片段。
(5)图2是对重组质粒测序的部分序列，若目的基因与质粒正确连接（启动子顺时针转录），则图中连接处的序列正确的是（ ）_____ （填序列编号）。
限制酶 | BamHⅠ | BclⅠ | SmaⅠ | Sau3AⅠ |
识别序列及切割位点（5′→3′） | G↓GATCC | T↓GATCA | CCC↓GGG | ↓GATC |
(1)为获取更多RST1基因，可通过PCR扩增，在反应体系中加入引物的作用是
① 5'-GACTACTCGCGCATCTA-3' ② 5'-ATCTACGCGCTCATCCG-3'③ 5'-GCGATGAGTAACGACGC-3' ④ 5'-CGCTACTCATTGCTGCG-3'⑤ 5'-TAGATGCGCGAGTAGGC-3' ⑥ 5'-CGCAGCAATGAGTAGCG-3'
(2)若PCR反应未得到任何扩增产物，主要原因有
①退火温度过高 ②Taq酶失活 ③设计的引物过短 ④变性温度过低 ⑤模板受到污染 ⑥Mg2＋浓度过低
(3)为将图中质粒A和RST1基因正确连接构建重组质粒B，设计RST1基因的引物时，在两种引物的5'端分别添加
(4)从平板上长出的菌落若提取重组质粒B利用Sau3AI进行酶切，最多可以得到
(5)图2是对重组质粒测序的部分序列，若目的基因与质粒正确连接（启动子顺时针转录），则图中连接处的序列正确的是（ ）
2023·江苏苏州·三模
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(1)为获取更多mt1D基因，可采用PCR技术扩增，在反应体系中除加入引物、dNTP、缓冲液、Mg2+外，还需要加入______ 。某同学设计了如下六种PCR引物，其中适合选用的一对引物是______ （选填序号）。
①5′—GACTACTCGCGCATCTA-3′②5′—ATCTACGCGCTCATCCG-3′③5′—GCGATGAGTAACGACGC-3′④5′—CGCTACTCATTGCTGCG-3′⑤5′—TAGATGCGCGAGTAGGC-3′⑥5′—CGCAGCAATGAGTAGCG-3′
(2)若PCR反应得到的非特异性扩增产物偏多，从引物设计和温度控制角度考虑，主要原因可能是______ 。
(3)为将图中质粒A和mt1D基因正确连接构建重组质粒B，设计mt1D基因的引物时，在两种引物的5′端分别添加______ 限制酶的识别序列，选用______ 限制酶切割质粒A，酶切后的载体和目的基因片段通过______ 酶作用后获得重组质粒。为了筛选出转入了重组质粒的受体细胞，应首先在筛选平板培养基添加______ ，再将平板上长出的菌落通过影印平板法接种到添加______ 的平板培养基上继续培养观察。
(4)若从平板上长出的菌落中提取重组质粒B利用Sau3A I进行完全酶切，最多可以得到______ 种大小不同的DNA片段。
(5)图2是对重组质粒测序的部分序列，若目的基因与质粒正确连接，则图中M连接处的序列正确的是______ （填序列编号）。
限制酶 | BamH I | Bcl I | Sma I | Sau3A I |
识别序列及切割位点（5′→3′） | G↓GATCC | T↓GATCA | CCC↓GGG | ↓GATC |
(1)为获取更多mt1D基因，可采用PCR技术扩增，在反应体系中除加入引物、dNTP、缓冲液、Mg2+外，还需要加入
①5′—GACTACTCGCGCATCTA-3′②5′—ATCTACGCGCTCATCCG-3′③5′—GCGATGAGTAACGACGC-3′④5′—CGCTACTCATTGCTGCG-3′⑤5′—TAGATGCGCGAGTAGGC-3′⑥5′—CGCAGCAATGAGTAGCG-3′
(2)若PCR反应得到的非特异性扩增产物偏多，从引物设计和温度控制角度考虑，主要原因可能是
(3)为将图中质粒A和mt1D基因正确连接构建重组质粒B，设计mt1D基因的引物时，在两种引物的5′端分别添加
(4)若从平板上长出的菌落中提取重组质粒B利用Sau3A I进行完全酶切，最多可以得到
(5)图2是对重组质粒测序的部分序列，若目的基因与质粒正确连接，则图中M连接处的序列正确的是
大肠杆菌的mt1D基因（基因序列5′-ATCTACGCG……TGAGTAGCG-3′）在番茄中超量表达后，增强了番茄对冷、干旱和盐胁迫的抗性。图1为构建重组质粒的过程示意图，BamHI、BclI、SmaI、Sau3AI为限制酶（四种酶的识别序列详见表），箭头表示转录方向。回答下列问题：
图2
(1)用PCR技术扩增mt1D基因，反应体系中除加入模板、引物、dNTP、含Mg2+的缓冲液外，还需要加入____ 。若PCR反应得到的非特异性扩增产物偏多，原因之一可能是退火温度____ （填“过低”或“过高”）。
(2)为保证图中质粒A和mtlD基因正确连接构建重组质粒B，设计mtlD基因的引物时，在两种引物的5′端分别添加____ 限制酶的识别序列，选用____ 限制酶切割质粒A，酶切后的载体和目的基因片段通过____ 酶作用后获得重组质粒。
(3)图2是对重组质粒测序的部分序列，若目的基因与质粒正确连接，则图中M连接处的序列正确的是____ （填序列编号）。
(4)为了筛选出转入了重组质粒的受体菌，应首先在筛选平板培养基添加____ ，再将平板上长出的菌落通过影印平板法接种到添加____ 的平板培养基上继续培养观察，然后在相应平板培养基上挑取转入了重组质粒的受体菌，进行培育转基因番茄的后续操作。
限制酶 | 识别序列5′→3′ |
BamHI | G↓GATCC |
BclI | T↓GATCA |
SmaI | CCC↓GGG |
Sau3AI | ↓GATC |
序列编号 | M连接处测序后部分序列 |
Q1 | 5′-GGATTCCGCAGC-3′ |
Q2 | 5′-CCCGGGATCTAC-3 |
Q3 | 5′-TGATCCATCTAC-3′ |
Q4 | 5′-TGATCACGCTAC-3′ |
(1)用PCR技术扩增mt1D基因，反应体系中除加入模板、引物、dNTP、含Mg2+的缓冲液外，还需要加入
(2)为保证图中质粒A和mtlD基因正确连接构建重组质粒B，设计mtlD基因的引物时，在两种引物的5′端分别添加
(3)图2是对重组质粒测序的部分序列，若目的基因与质粒正确连接，则图中M连接处的序列正确的是
(4)为了筛选出转入了重组质粒的受体菌，应首先在筛选平板培养基添加
切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶，这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。迄今分离得到的限制酶有数千种，其中许多已经被商业化生产。
(1)限制酶在原核生物中的主要作用是___ ，限制酶能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的___ 键断开。
(2)如图将质粒A和目的基因正确连接构建重组质粒B，设计扩增目的基因的引物时，在两种引物的5'端分别添加___ （填限制酶）的识别序列，选用___ （填限制酶）切割质粒A，酶切后的载体和目的基因片段通过___ （填“E.coli”或“T4”）DNA连接酶作用后获得重组质粒。
(3)导入重组质粒的大肠杆菌对两种抗生素的抗性是___ 。若从平板上长出的菌落中提取重组质粒B，用Sau3AⅠ进行完全酶切，最多可以得到___ 种大小不同的DNA片段。对重组质粒进行测序，若目的基因与质粒正确连接，则图中M连接处的序列可能是___ 。
A.5′-GGATCCCGCAGCAA-3′
B.5′-CCCGGGATCTACGC-3′
C.5′-TGATCCATCTACGC-3′
D.5′-TGATCACGCTACTC-3′
(1)限制酶在原核生物中的主要作用是
(2)如图将质粒A和目的基因正确连接构建重组质粒B，设计扩增目的基因的引物时，在两种引物的5'端分别添加
| 限制酶 | 识别序列及切割位点（5′→3′） |
| BamH I | G↓GATCC |
| Bcl I | T↓GATCA |
| Sma I | CCC↓GGG |
| Sau3A I | ↓GATC |
(3)导入重组质粒的大肠杆菌对两种抗生素的抗性是
A.5′-GGATCCCGCAGCAA-3′
B.5′-CCCGGGATCTACGC-3′
C.5′-TGATCCATCTACGC-3′
D.5′-TGATCACGCTACTC-3′
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