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非选择题-解答题 适中0.65 引用1 组卷134
高等植物中的乙烯生物合成受到发育阶段和环境的共同调节,其中乙烯合成酶在这一过程中起到至关重要的作用。拟南芥乙烯合成酶相关基因主要有两种:AtACS4和AtACS5。为研究以上基因表达水平与发育阶段的关系,科学家将AtACS4和AtACS5的启动子分别和GUS报告基因融合,并转入拟南芥。图1为使用的载体图谱,kanr为卡那霉素抗性基因,Ampr为氨苄青霉素抗性基因。回答下列问题:
             
(1)构建重组DNA分子:取足量的拟南芥叶片并提取_____,通过_____得到两种启动子片段的拷贝,为使启动子正确插入载体,在获得的启动子两端分别引入__________两种不同限制酶的识别序列,再用_____酶处理启动子与表达载体获得重组DNA分子。
(2)农杆菌转化拟南芥:将两种重组DNA分子分别导入农杆菌,后将转化的农杆菌分别置于添加了_____的LB液体培养基中进行培养。为确定培养所得农杆菌确实转入了重组DNA分子,可以通过_____进行检测。后将转基因农杆菌与消毒后的拟南芥叶片共同培养,将共同培养后的烟草叶片转入含有营养物以及__________培养基(填写培养基名称)中脱菌、诱导培养和筛选。经过发芽和生根培养后的组培苗需进行炼苗,炼苗的作用是_____
(3)拟南芥乙烯合成酶的表达特点:使用GUS染液染色后,具GUS基因表达产物的部位会现蓝色,用肉眼或在显微镜下可看到,且在一定程度下根据染色深浅可反映出GUS基因的表达水平。使用GUS染液对不同发育阶段的两种转基因拟南芥进行染色。AtACS4和AtACS5的启动子和GUS报告基因融合后进行转化获得的转基因拟南芥经过GUS染色后的实验结果依次为图2的A、B。可以推测AtACS4和AtACS5的表达特点为_____
23-24高三上·浙江·开学考试
知识点:DNA重组技术的基本工具基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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高等植物中的乙烯生物合成受到发育阶段和环境的共同调节,其中乙烯合成酶在这一过程中起到至关重要的作用。拟南芥乙烯合成酶相关基因主要有两种:AtACS4和AtACSS为研究以上基因表达水平与发育阶段的关系,科学家将AtACS4和AtACS5的基因分别和GUS报告基因融合,并转入拟南芥。图1为使用的载体图谱,kan'为卡那霉素抗性基因,Amp'为氨苄青霉素抗性基因。据此回答下列问题:


幼嫩根

幼嫩叶

成熟根

成熟叶

AtACS4


++

++++

AtACS5

+

++++

++

++

注:+越多,表示GUS基因产物经染色后颜色越深
(1)目的基因的克隆:根据AtACS4和AtACS5序列信息,设计引物对目的基因PCR扩增,对扩增产物进行电泳。制备凝胶时选择合适的梳子来制备样品孔,插入齿梳的时间应在琼脂糖凝固_____(“前”或“后”)。电泳过程中,凝胶点样孔端应靠近电泳槽___极接口,电泳完成后切胶回收DNA,测序验证。
(2)构建重组DNA分子:测序后可知所得条带确为实验所需条带且无突变。为使目的基因正确插入载体相应位置,设计引物时,在目的基因两端分别引入___________两种限制酶的识别序列。用____________酶处理PCR所得的DNA片段与空载体(未插入目的基因的载体),可获得重组DNA 分子。
(3)将重组DNA 导入农杆菌:用氯化钙处理后的农杆菌,_____发生了变化,成为感受态细胞。低温下将农杆菌与重组DNA混匀,使外源DNA粘附与受体细胞表面,最后短暂热刺激,使外源 DNA 进入受体细胞。将受体菌接种在_____(“含”或“不含”)抗生素的培养液中,慢速培养一段时间,使细胞恢复回正常状态,并表达相关基因。两小时后,再将农杆菌溶液涂布于添加了___________的LB平板进行筛选。
(4)农杆菌转化拟南芥:将转基因农杆菌与消毒处理拟南芥叶片共同培养,共同培养后的拟南芥叶片转入含氨苄青霉素的固体培养基,进行多次______培养,主要目的是除去农杆菌和筛选转化的植物细胞。若培养基中氨苄青霉素浓度太低,可能会出现较多假阳性植株,因此在转基因前需要对受体进行_____________检测。经过发芽和生根培养后的组培苗,在移栽大田前需进行炼苗,炼苗的作用是____________
(5)拟南芥乙烯合成酶的表达特点:使用GUS染液染色后,具GUS基因表达产物的部位会现蓝色,用肉眼可看到,且一定程度下染色深浅可反映出GUS基因的表达水平。使用GUS染液对不同发育阶段的两种转基因拟南芥进行染色。AtACS4和AtACS5的启动子和GUS报告基因融合后进行转化、染色后获得的实验结果如上表,可以推测______启动子在幼嫩植铢的叶片中表达量更高,AtACS4在根中的表达情况是_______________________

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