非选择题-解答题 适中0.65 引用1 组卷134
高等植物中的乙烯生物合成受到发育阶段和环境的共同调节,其中乙烯合成酶在这一过程中起到至关重要的作用。拟南芥乙烯合成酶相关基因主要有两种:AtACS4和AtACS5。为研究以上基因表达水平与发育阶段的关系,科学家将AtACS4和AtACS5的启动子分别和GUS报告基因融合,并转入拟南芥。图1为使用的载体图谱,kanr为卡那霉素抗性基因,Ampr为氨苄青霉素抗性基因。回答下列问题:
(1)构建重组DNA分子:取足量的拟南芥叶片并提取_____ ,通过_____ 得到两种启动子片段的拷贝,为使启动子正确插入载体,在获得的启动子两端分别引入_____ 和_____ 两种不同限制酶的识别序列,再用_____ 酶处理启动子与表达载体获得重组DNA分子。
(2)农杆菌转化拟南芥:将两种重组DNA分子分别导入农杆菌,后将转化的农杆菌分别置于添加了_____ 的LB液体培养基中进行培养。为确定培养所得农杆菌确实转入了重组DNA分子,可以通过_____ 进行检测。后将转基因农杆菌与消毒后的拟南芥叶片共同培养,将共同培养后的烟草叶片转入含有营养物以及_____ 的_____ 培养基(填写培养基名称)中脱菌、诱导培养和筛选。经过发芽和生根培养后的组培苗需进行炼苗,炼苗的作用是_____ 。
(3)拟南芥乙烯合成酶的表达特点:使用GUS染液染色后,具GUS基因表达产物的部位会现蓝色,用肉眼或在显微镜下可看到,且在一定程度下根据染色深浅可反映出GUS基因的表达水平。使用GUS染液对不同发育阶段的两种转基因拟南芥进行染色。AtACS4和AtACS5的启动子和GUS报告基因融合后进行转化获得的转基因拟南芥经过GUS染色后的实验结果依次为图2的A、B。可以推测AtACS4和AtACS5的表达特点为_____ 。
(1)构建重组DNA分子:取足量的拟南芥叶片并提取
(2)农杆菌转化拟南芥:将两种重组DNA分子分别导入农杆菌,后将转化的农杆菌分别置于添加了
(3)拟南芥乙烯合成酶的表达特点:使用GUS染液染色后,具GUS基因表达产物的部位会现蓝色,用肉眼或在显微镜下可看到,且在一定程度下根据染色深浅可反映出GUS基因的表达水平。使用GUS染液对不同发育阶段的两种转基因拟南芥进行染色。AtACS4和AtACS5的启动子和GUS报告基因融合后进行转化获得的转基因拟南芥经过GUS染色后的实验结果依次为图2的A、B。可以推测AtACS4和AtACS5的表达特点为
23-24高三上·浙江·开学考试
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高等植物中的乙烯生物合成受到发育阶段和环境的共同调节,其中乙烯合成酶在这一过程中起到至关重要的作用。拟南芥乙烯合成酶相关基因主要有两种:AtACS4和AtACSS为研究以上基因表达水平与发育阶段的关系,科学家将AtACS4和AtACS5的基因分别和GUS报告基因融合,并转入拟南芥。图1为使用的载体图谱,kan'为卡那霉素抗性基因,Amp'为氨苄青霉素抗性基因。据此回答下列问题:
注:+越多,表示GUS基因产物经染色后颜色越深
(1)目的基因的克隆:根据AtACS4和AtACS5序列信息,设计引物对目的基因PCR扩增,对扩增产物进行电泳。制备凝胶时选择合适的梳子来制备样品孔,插入齿梳的时间应在琼脂糖凝固_____ (“前”或“后”)。电泳过程中,凝胶点样孔端应靠近电泳槽___ 极接口,电泳完成后切胶回收DNA,测序验证。
(2)构建重组DNA分子:测序后可知所得条带确为实验所需条带且无突变。为使目的基因正确插入载体相应位置,设计引物时,在目的基因两端分别引入___________ 两种限制酶的识别序列。用____________ 酶处理PCR所得的DNA片段与空载体(未插入目的基因的载体),可获得重组DNA 分子。
(3)将重组DNA 导入农杆菌:用氯化钙处理后的农杆菌,_____ 发生了变化,成为感受态细胞。低温下将农杆菌与重组DNA混匀,使外源DNA粘附与受体细胞表面,最后短暂热刺激,使外源 DNA 进入受体细胞。将受体菌接种在_____ (“含”或“不含”)抗生素的培养液中,慢速培养一段时间,使细胞恢复回正常状态,并表达相关基因。两小时后,再将农杆菌溶液涂布于添加了___________ 的LB平板进行筛选。
(4)农杆菌转化拟南芥:将转基因农杆菌与消毒处理拟南芥叶片共同培养,共同培养后的拟南芥叶片转入含氨苄青霉素的固体培养基,进行多次______ 培养,主要目的是除去农杆菌和筛选转化的植物细胞。若培养基中氨苄青霉素浓度太低,可能会出现较多假阳性植株,因此在转基因前需要对受体进行_____________ 检测。经过发芽和生根培养后的组培苗,在移栽大田前需进行炼苗,炼苗的作用是____________ 。
(5)拟南芥乙烯合成酶的表达特点:使用GUS染液染色后,具GUS基因表达产物的部位会现蓝色,用肉眼可看到,且一定程度下染色深浅可反映出GUS基因的表达水平。使用GUS染液对不同发育阶段的两种转基因拟南芥进行染色。AtACS4和AtACS5的启动子和GUS报告基因融合后进行转化、染色后获得的实验结果如上表,可以推测______ 启动子在幼嫩植铢的叶片中表达量更高,AtACS4在根中的表达情况是_______________________ 。
幼嫩根 | 幼嫩叶 | 成熟根 | 成熟叶 | |
AtACS4 | 艹 | ++ | ++++ | |
AtACS5 | + | ++++ | ++ | ++ |
(1)目的基因的克隆:根据AtACS4和AtACS5序列信息,设计引物对目的基因PCR扩增,对扩增产物进行电泳。制备凝胶时选择合适的梳子来制备样品孔,插入齿梳的时间应在琼脂糖凝固
(2)构建重组DNA分子:测序后可知所得条带确为实验所需条带且无突变。为使目的基因正确插入载体相应位置,设计引物时,在目的基因两端分别引入
(3)将重组DNA 导入农杆菌:用氯化钙处理后的农杆菌,
(4)农杆菌转化拟南芥:将转基因农杆菌与消毒处理拟南芥叶片共同培养,共同培养后的拟南芥叶片转入含氨苄青霉素的固体培养基,进行多次
(5)拟南芥乙烯合成酶的表达特点:使用GUS染液染色后,具GUS基因表达产物的部位会现蓝色,用肉眼可看到,且一定程度下染色深浅可反映出GUS基因的表达水平。使用GUS染液对不同发育阶段的两种转基因拟南芥进行染色。AtACS4和AtACS5的启动子和GUS报告基因融合后进行转化、染色后获得的实验结果如上表,可以推测
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