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非选择题-解答题 适中0.65 引用1 组卷114
人干扰素(IFN)是机体免疫细胞产生的一类淋巴因子,通过诱导细胞合成抗病毒蛋白实现对病毒的抑制,同时还可增强各种免疫细胞的活力,进而增强人体抗病毒的能力。用白细胞生产干扰素,每个细胞最多只能产生100~1000个干扰素分子,而用基因工程技术改造的大肠杆菌发酵生产,在1~2天内每个菌体能产生20万个干扰素分子。图1、图2为质粒结构和IFN基因。回答下列问题:
          
(1)图1为所用载体示意图,质粒DNA含有启动子,启动子是_________识别并结合的位点。质粒DNA上的复制原点可以保证质粒在受体细胞中能____________
(2)从基因组文库中获取的IFN基因,导入大肠杆菌_________(填“能”或“不能”)成功获得表达,原因是________。目前PCR反应体系中使用的是Taq酶而不是大肠杆菌的DNA聚合酶,原因是_________
(3)图1中的Amp可作为________基因。欲利用上述材料构建基因表达载体,不选用EcoRⅠ的原因是______
2023·陕西宝鸡·二模
知识点:PCR扩增的原理与过程基因表达载体的构建目的基因的检测与鉴定 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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干扰素是脊椎动物受多种因素诱导产生的一组抗病毒分泌蛋白,对体液免疫和细胞免疫均有调节作用。随着现代科学技术的发展,可以通过转基因工程技术利用大肠杆菌生产干扰素,如图为干扰素表达载体的质粒简图,小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ、SamⅠ的酶切位点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRⅠ、BamHⅠ、SamⅠ在内的多种酶的酶切位点。外源DNA插入到ampR或tetR中会导致相应的基因失活(ampR表示氨苄青霉素抗性基因,tetR表示四环素抗性基因,P表示启动子,T表示终止子,ori表示复制原点)。
回答下列相关问题:
   
(1)从人白细胞中提取干扰素基因的mRNA,通过以该mRNA为模板合成cDNA,这一过程需要的酶是_____,再利用PCR技术扩增目的基因。
(2)在进行基因表达载体构建时,为了避免出现自身环化,在图中可选用_____酶对该质粒和目的基因进行切割。被切割后的质粒和目的基因经DNA连接酶连接后形成重组基因表达载体,该重组基因表达载体中还有启动子,启动子是指_____,一般要先用_____处理大肠杆菌细胞后,再将重组基因表达载体导入大肠杆菌中。根据上图分析,为了筛选出含质粒的大肠杆菌,需要用含_____的培养基进行培养。
(3)检测大肠杆菌细胞内干扰素基因是否成功翻译可采用_____技术,经检测从大肠杆菌细胞中获得的干扰素未能达到预期的生物活性,其原因可能是_____

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