非选择题-解答题 适中0.65 引用2 组卷144
黏膜免疫系统作为第一道免疫防御屏障,能够参与保护生物体免受病原体的感染。多聚免疫球蛋白受体(pIgR)作为黏膜免疫防御的一个关键因子,能够介导免疫球蛋白跨过上皮细胞进行转运和分泌,发挥免疫球蛋白在黏液中清除病原体和毒素的作用。研究人员从大菱鲆提取pIgR基因,针对不同器官组织开展了pIgR基因研究(如下图),其中DEPC物质可与RNA酶结合使酶发生变性。________________ ,提取过程加入DEPC物质作用是_______________ 。
(2)为将pIgR基因以正确方向插入质粒需要双酶切,这就要求在设计引物时,需在引物的5'端加入相应的酶切位点。已知a链为转录模板链,引物1的5'端酶切位点的碱基序列为GAATTC,则引物2的5'端酶切位点的碱基序列为_______________ ,理由是_______________ 。
(3)构建pIgR基因表达载体后,与处于感受态的大肠杆菌菌株混合,pIgR基因表达载体进入菌体内,此过程称为_______________ 。然后将菌液涂布在含有_______________ 的LB固体培养基培养,加入诱导剂诱导pIgR基因在大肠杆菌中表达,提取、纯化蛋白质。
(4)在整个实验过程中多次使用PCR技术,如利用PCR技术扩增pIgR基因时,需要在反应体系中加入______________ 、_____________ 、引物、耐高温的DNA聚合酶、缓冲液等物质,设置PCR仪器的控制参数,启动三步骤扩增过程,在三个步骤中温度最低是______________ 。
(1)研究人员通过mRNA得到cDNA时所需要的酶是
(2)为将pIgR基因以正确方向插入质粒需要双酶切,这就要求在设计引物时,需在引物的5'端加入相应的酶切位点。已知a链为转录模板链,引物1的5'端酶切位点的碱基序列为GAATTC,则引物2的5'端酶切位点的碱基序列为
(3)构建pIgR基因表达载体后,与处于感受态的大肠杆菌菌株混合,pIgR基因表达载体进入菌体内,此过程称为
(4)在整个实验过程中多次使用PCR技术,如利用PCR技术扩增pIgR基因时,需要在反应体系中加入
22-23高二下·山东淄博·期末
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科研人员克隆了猪白细胞抗原基因(SLA-2基因),构建了该基因的真核表达载体,进行了猪肾上皮细胞表达研究。实验的主要流程如下。请回答:
(1)过程①需要在PCR反应体系中添加的物质有______ 以及引物、DNA模板、缓冲液和Mg2+等,为了使得SLA-2基因能定向插入质粒A中,设计引物时需要在5′端添加______ 、______ (填限制酶的名称)识别序列。
(2)过程②将重组质粒导入大肠杆菌的目的是______ ,该过程需要用______ 处理大肠杆菌,使其成为感受态细胞,然后将大肠杆菌涂布在含有______ (抗生素)的培养基上培养。
(3)过程⑦研究人员用小鼠抗SLA抗原肽单克隆抗体检测肾上皮细胞生产的抗原肽,单克隆抗体能检测其是否具有正确的______ ,从而是否具有生物活性。
(4)科研人员将单个突变碱基引入SLA-2基因组cDNA质粒克隆中,流程如下图。已知在细菌体内合成的DNA分子有甲基化修饰,通过PCR扩增的DNA链无甲基化修饰。
①DpnI识别甲基化的GATC四个碱基序列,因此其能将______ 水解消化掉。在大肠杆菌细胞内完成缺刻修复需要______ 酶。
②已知质粒A为n个,经过程①扩增18个循环,需要突变引物______ 个,将过程②形成的产物全部转入大肠杆菌后复制a轮,得到双链突变的DNA______ 个。
限制酶 | BclI | NotI | XbaI | Sau3AI |
识别序列及切割位点 | T↓GATCA | GC↓GGCCGC | T↓CTAGA | ↓GATC |
(1)过程①需要在PCR反应体系中添加的物质有
(2)过程②将重组质粒导入大肠杆菌的目的是
(3)过程⑦研究人员用小鼠抗SLA抗原肽单克隆抗体检测肾上皮细胞生产的抗原肽,单克隆抗体能检测其是否具有正确的
(4)科研人员将单个突变碱基引入SLA-2基因组cDNA质粒克隆中,流程如下图。已知在细菌体内合成的DNA分子有甲基化修饰,通过PCR扩增的DNA链无甲基化修饰。
①DpnI识别甲基化的GATC四个碱基序列,因此其能将
②已知质粒A为n个,经过程①扩增18个循环,需要突变引物
在现代生物学中,PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链式反应)是一项必不可少的技术,它可以复制出大量的DNA片段,为基因工程和分子诊断等提供了有力的技术支撑。
(1)已知酵母菌不能吸收淀粉,若想使新型酵母菌可以直接利用淀粉发酵,则应导入多步分解淀粉所需的多种酶,推测这些酶生效的场所应该是___ (填“细胞内”和“细胞外”)。
(2)同源切割是一种代替___ 将目的基因导入基因表达载体的方法。当目的基因两侧的小段序列与基因表达载体上某序列相同时,就可以发生同源切割,将目的基因直接插入。研究人员,运用同源切割的方式,在目的基因两端加上一组同源序列A-B,已知酵母菌体内DNA有许多A-B序列位点可以同源切割插入。构建完成的目的基因结构如图,则应选择图中的引物___ 对目的基因进行PCR。PCR反应体系中需加入模板、___ 、___ 引物、Mg2+、缓冲液等。
(3)已知酵母菌不能合成尿嘧啶,因此尿嘧啶合成基因(UGA)常用作标记基因,又知尿嘧啶可以使5-氟乳清酸转化为对酵母菌有毒物质。
(i)导入目的基因的酵母菌应在___ 的培养基上筛选培养。
(ii)由于需要导入多种酶基因,需要多次筛选,因此在导入一种目的基因后,要切除UGA基因,再重新导入。切去UGA基因的酵母菌应在___ 的培养基上筛选培养。
(4)家畜胚胎性别鉴定对畜牧业发展具有重要意义,科研人员利用PCR技术扩增奶牛Y染色体上雄性决定基因(SRY)和常染色体上的酪蛋白基因(CSN1S1),进行早期胚胎性别鉴定和胚胎移植,获得高产奶牛。请完成下表相关内容。
(5)PCR过程中反应温度最低的一步是___ ,该步骤温度设置与引物的___ 相关。
(1)已知酵母菌不能吸收淀粉,若想使新型酵母菌可以直接利用淀粉发酵,则应导入多步分解淀粉所需的多种酶,推测这些酶生效的场所应该是
(2)同源切割是一种代替
(3)已知酵母菌不能合成尿嘧啶,因此尿嘧啶合成基因(UGA)常用作标记基因,又知尿嘧啶可以使5-氟乳清酸转化为对酵母菌有毒物质。
(i)导入目的基因的酵母菌应在
(ii)由于需要导入多种酶基因,需要多次筛选,因此在导入一种目的基因后,要切除UGA基因,再重新导入。切去UGA基因的酵母菌应在
(4)家畜胚胎性别鉴定对畜牧业发展具有重要意义,科研人员利用PCR技术扩增奶牛Y染色体上雄性决定基因(SRY)和常染色体上的酪蛋白基因(CSN1S1),进行早期胚胎性别鉴定和胚胎移植,获得高产奶牛。请完成下表相关内容。
实验目的 | 方法步骤要点 |
囊胚样品DNA提取 | 选取 |
PCR引物的设计和合成 | 根据牛的SRY和CSN1S1基因序列设计合成4对引物 |
PCR扩增 | 预变性→变性→退火→延伸 |
鉴定分析 | |
对受体奶牛注射孕激素(或前列腺素) | |
胚胎移植 | 将符合要求的胚胎移植到受体奶牛的子宫内 |
(5)PCR过程中反应温度最低的一步是
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