科学家研究嗜热土壤芽孢杆菌得出这种杆菌能产生β葡萄糖苷酶（BgIB），这是一种耐热纤维素酶，为了在工业生产中更好地应用，开展了以下试验，依题回答下列问题。
I.利用大肠杆菌表达BglB酶
(1)PCR扩增BgIB基因时，需要的条件有________（至少答3点）。
   
注：图中限制酶的识别序列及切割形成的黏性末端均不相同
(2)上图为质粒限制酶切图谱。BgIB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的BgIB基因重组进该质粒，扩增的BglB基因两端需分别引入____和______限制酶的识别序列。
(3)大肠杆菌不能降解纤维素，原因是_______，但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为___________。
II.温度对BglB酶活性的影响
(4)据图1、2可知，80°C保温时间达到______分钟后，BglB酶会失活；为高效利用BgIB酶降解纤维素，反应温度最好控制在_______（单选）。
A.50°C                    B.60°C                      C.70°C                    D.80°C
   
注：酶的热稳定性是酶在一定温度下，保温一段时间后通过其活性的保持程度来反映的III.鉴定筛选出的大肠杆菌菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒
(5)为鉴定筛选出的大肠杆菌菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图3所示甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中相应位置，PCR鉴定时应选择的一对引物是___________。某学生尝试用图中另外一对引物，结果从某一菌落的质粒中扩增了400bp片段，原因是_____________________。