非选择题-解答题 较难0.4 引用1 组卷124
真核基因的转录激活因子是两种相对独立的蛋白质BD和AD组成的复合物,BD负责识别基因上游特定的DNA序列并与之结合(不同基因的BD不同),AD负责活化转录过程,两者单独作用时都不能启动转录。在科学研究中,往往利用该原理判断两种蛋白质能否相互作用。具体过程为:让BD基因与诱饵蛋白基因融合,让AD基因与待测蛋白基因融合,并让它们在酵母菌中表达出相应的融合蛋白,若诱饵蛋白与待测蛋白可以相互作用,则AD和BD就能充分接近形成复合物,并启动标记基因的表达。具体过程如图1:
(1)构建重组质粒甲时使用双酶切可以有效防止目的基因与质粒________ ;用EcoR I和Sal I双酶切后,检测样品1、2中是否含有重组质粒乙,电泳结果为图2,其中_______ 号样品为成功插入AD-待测蛋白基因的重组质粒。
(2)质粒导入前,原核细胞作为受体细胞一般先用Ca2+处理,与此类似,Y2H酵母菌母液需先用醋酸锂(LiAc)处理,推测其目的是________ 。与原核细胞相比,由于酵母菌具有_______ 能对蛋白质进行加工,故蛋白质的空间构象不受影响,这也是选择其作为受体细胞的原因之一。
(3)野生型Y2H酵母菌缺乏His3(组氨酸合成基因)和Mel1(半乳糖苷酶合成基因。已知在培养基中含有X-gal的情况下,半乳糖苷酶的分泌可使酵母菌落呈蓝色,否则呈白色)。将这两种基因作为标记基因导入Y2H酵母菌将其制备成受体菌,来判断诱饵蛋白与待测蛋白能否相互作用。重组质粒甲和乙导入受体菌后,将受体菌接种到______ 培养基中培养。若观察到受体菌菌落能存活且呈现______ 色,则说明诱饵蛋白和待测蛋白能相互作用。
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(1)构建重组质粒甲时使用双酶切可以有效防止目的基因与质粒
(2)质粒导入前,原核细胞作为受体细胞一般先用Ca2+处理,与此类似,Y2H酵母菌母液需先用醋酸锂(LiAc)处理,推测其目的是
(3)野生型Y2H酵母菌缺乏His3(组氨酸合成基因)和Mel1(半乳糖苷酶合成基因。已知在培养基中含有X-gal的情况下,半乳糖苷酶的分泌可使酵母菌落呈蓝色,否则呈白色)。将这两种基因作为标记基因导入Y2H酵母菌将其制备成受体菌,来判断诱饵蛋白与待测蛋白能否相互作用。重组质粒甲和乙导入受体菌后,将受体菌接种到
22-23高二下·天津南开·阶段练习
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植物对病原微生物的防御反应包含多种物质介导的多条途径,其中水杨酸(SA)和茉莉酸(JA)可以诱导植物合成防御素等物质,引发防御反应。
(1)科研人员选用野生型和E3基因功能缺失突变体拟南芥,分别用一定浓度的SA、JA溶液处理,然后从各组植株中提取_________ ,反转录形成cDNA,再运用______ 技术扩增,进而检测防御素合成关键基因PDF的转录水平,结果见图1。
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野生型的实验结果可说明,SA和JA对PDF基因转录的作用存在______ 关系。比较两组实验结果可知SA和JA的作用与E3有关。科研人员构建含有E3基因的Ti质粒,利用___________ 法将其导入E3功能缺失突变体拟南芥,重复上述处理后进行测定。若实验结果为__________________ ,则支持上述结论。
(2)PDF基因转录过程需要ORA蛋白激活。科研人员依据以下原理研究了E3蛋白与ORA蛋白之间的关系。原理如下:在酵母菌细胞中,可以利用基因工程表达出两种融合蛋白(BD—待测蛋白X、AD—待测蛋白Y)。如图2a,若两种待测蛋白可以相互作用,则AD蛋白和BD蛋白就能充分接近形成复合物,并启动组氨酸合成基因的转录;否则组氨酸合成基因不能转录(如图2b)。
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由此,科研人员构建两种重组载体(见下表),将它们导入不能合成亮氨酸、色氨酸和组氨酸的缺陷型酵母菌中。
上表中的相应基因分别为①____________ ;②____________ 。将转基因酵母菌接种到不含亮氨酸、色氨酸和___________ 的固体培养基上进行培养,观察到____________ ,说明E3蛋白可以与ORA蛋白相互作用。
(3)科研人员进一步研究SA在调控PDF基因转录过程中与E3和ORA的关系,结果如图3、图4所示。
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分析图3可知, SA可以促进ORA基因转录,且该过程与E3无关。判断依据:与对照组相比,SA处理后的野生型和突变体中的ORA基因转录量______________ 。研究还发现,SA可以使E3蛋白增多。结合(2)结论和图3、图4,推测SA调节ORA蛋白量的机制是_____________ ,进而调控PDF基因的转录过程。
(1)科研人员选用野生型和E3基因功能缺失突变体拟南芥,分别用一定浓度的SA、JA溶液处理,然后从各组植株中提取
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野生型的实验结果可说明,SA和JA对PDF基因转录的作用存在
(2)PDF基因转录过程需要ORA蛋白激活。科研人员依据以下原理研究了E3蛋白与ORA蛋白之间的关系。原理如下:在酵母菌细胞中,可以利用基因工程表达出两种融合蛋白(BD—待测蛋白X、AD—待测蛋白Y)。如图2a,若两种待测蛋白可以相互作用,则AD蛋白和BD蛋白就能充分接近形成复合物,并启动组氨酸合成基因的转录;否则组氨酸合成基因不能转录(如图2b)。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2019/4/9/2178774153715712/2204954111385600/STEM/cdd7ee6417e2401ea9dbc47f66769c6e.png?resizew=424)
由此,科研人员构建两种重组载体(见下表),将它们导入不能合成亮氨酸、色氨酸和组氨酸的缺陷型酵母菌中。
重组载体包含的部分基因 | |
载体1 | AD蛋白基因 E3蛋白基因 亮氨酸合成基因 |
载体2 | ① 基因 ② 基因 色氨酸合成基因 |
上表中的相应基因分别为①
(3)科研人员进一步研究SA在调控PDF基因转录过程中与E3和ORA的关系,结果如图3、图4所示。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2019/4/9/2178774153715712/2204954111385600/STEM/3aaa5b52d1fb4cd7af10e5fddc717602.png?resizew=458)
分析图3可知, SA可以促进ORA基因转录,且该过程与E3无关。判断依据:与对照组相比,SA处理后的野生型和突变体中的ORA基因转录量
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