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非选择题-解答题 较难0.4 引用4 组卷417
同源重组技术结合tetr-sacB双重选择系统可对基因进行敲除与回补,研究基因的功能。下图是科研人员利用该方法对大肠杆菌tacZ基因进行敲除与回补的相关过程,其中tetr是四环素抗性基因,sacB基因(2071bp)是蔗糖致死基因,LacZ基因表达产物能将无色化合物X-gal水解成蓝色化合物。请回答下列问题:

   

(1)过程①PCR除需要加入Taq酶、dNTP、缓冲液、Mg2+外,还需加入______,所加dNTP的作用有______
(2)为保证sacB基因和质粒2定向连接,设计引物P1、P2时,需在引物5'端添加限制酶_____的识别序列;过程②需要限制酶和________酶。
(3)过程③中,需先用Ca2+处理大肠杆菌,使其成为_______细胞。筛选导入质粒3的大肠杆菌时需在培养基中添加________
(4)下图是对质粒3转化菌落进行PCR验证时的产物电泳结果,泳道4、5、7对应的菌株可能转化成功,判断的理由是______。过程⑤PCR中设计引物P3、P4时,需在引物5′端分别添加_______基因两端的同源序列。

   

(5)过程⑦中,在含有四环素和_____的培养基中出现了白色菌落,即为筛选出的敲除LacZ基因菌株。过程⑧通过同源重组技术结合tetr-sacB双重选择系统可对LacZ基因进行回补,筛选LacZ基因回补菌株时应在培养基中添加_____
22-23高二下·江苏徐州·期末
知识点:PCR扩增的原理与过程DNA重组技术的基本工具将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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Ⅰ、同源重组技术结合tetr-sacB双重选择系统可对基因进行敲除与回补,研究基因的功能。下图是科研人员利用该方法对大肠杆菌LacZ基因进行敲除与回补的相关过程,其中tetr是四环素抗性基因,sacB基因是蔗糖致死基因,LacZ基因表达产物能将无色化合物X-gal水解成蓝色化合物。请回答下列问题:

限制酶

EcoRⅠ

BamHⅠ

HindⅢ

XmaⅠ

识破序列和切割位点

5'G↓AATTC3'

5'G↓GATCC3'

5'A↓AGCTT3'

5'C↓CCGGG3'


(1)过程①PCR中影响退火温度的因素有引物的长度、______,若温度过低会导致______
(2)过程①中,设计两种引物时需在引物5'端分别添加的碱基序列是____________;过程⑤中,设计两种引物时需在引物5'端分别添加上______基因两端的同源序列。
(3)过程⑦中,在含有______的培养基中出现了白色菌落,即为筛选出的敲除LacZ基因菌株。过程⑧通过同源重组技术结合tetr-sacB双重选择系统可对LacZ基因进行回补,筛选LacZ基因回补菌株时应在培养基中添加______
Ⅱ、咪唑喹啉衍生物(BEZ)和长春花碱(VLB)用于治疗卵巢癌、肝癌等癌症,为研究二者对肾癌的治疗效果,研究人员进行了系列实验。

(4)探究BEZ和VLB单独及联合使用对肾癌细胞凋亡的影响,结果如图1所示。该实验的自变量是______,实验结果表明______对癌细胞凋亡无明显影响。
(5)Caspase—3是细胞内促凋亡蛋白,Mcl—1是Caspase—3基因表达的调控因子。为研究BEZ和VLB治疗肾癌的机制,研究人员对各组细胞进行实验处理24小时后,检测Mcl—1的mRNA和蛋白质含量,结果如图2。选用GAPDH作为内参的原因是______
(6)综合图1、图2结果,在下列箭头上标明“+”或“-”(分别表示“促进”和“抑制”),图示药物发挥作用的机理______

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