非选择题-解答题 较难0.4 引用4 组卷417
同源重组技术结合tetr-sacB双重选择系统可对基因进行敲除与回补,研究基因的功能。下图是科研人员利用该方法对大肠杆菌tacZ基因进行敲除与回补的相关过程,其中tetr是四环素抗性基因,sacB基因(2071bp)是蔗糖致死基因,LacZ基因表达产物能将无色化合物X-gal水解成蓝色化合物。请回答下列问题:______ ,所加dNTP的作用有______ 。
(2)为保证sacB基因和质粒2定向连接,设计引物P1、P2时,需在引物5'端添加限制酶_____ 的识别序列;过程②需要限制酶和________ 酶。
(3)过程③中,需先用Ca2+处理大肠杆菌,使其成为_______ 细胞。筛选导入质粒3的大肠杆菌时需在培养基中添加________ 。
(4)下图是对质粒3转化菌落进行PCR验证时的产物电泳结果,泳道4、5、7对应的菌株可能转化成功,判断的理由是______ 。过程⑤PCR中设计引物P3、P4时,需在引物5′端分别添加_______ 基因两端的同源序列。_____ 的培养基中出现了白色菌落,即为筛选出的敲除LacZ基因菌株。过程⑧通过同源重组技术结合tetr-sacB双重选择系统可对LacZ基因进行回补,筛选LacZ基因回补菌株时应在培养基中添加_____ 。
(2)为保证sacB基因和质粒2定向连接,设计引物P1、P2时,需在引物5'端添加限制酶
(3)过程③中,需先用Ca2+处理大肠杆菌,使其成为
(4)下图是对质粒3转化菌落进行PCR验证时的产物电泳结果,泳道4、5、7对应的菌株可能转化成功,判断的理由是
22-23高二下·江苏徐州·期末
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同源重组技术结合tetr-sacB双重选择系统可对基因进行敲除与回补,研究基因的功能。下图是科研人员利用该方法对大肠杆菌LacZ基因进行敲除与回补的相关过程,其中tetr是四环素抗性基因,sacB基因(2071bp)是蔗糖致死基因,LacZ基因表达产物能将无色化合物X-gal水解成蓝色化合物。请回答下列问题。
(1)PCR过程除需要加入引物和模板外,还需加入________ 等,影响退火温度的因素有引物的长度、________ ,若温度过低会导致________ 。
(2)过程①中,设计两种引物时需在引物5'端分别添加的碱基序列是________ 、________ ;过程⑤中,设计两种引物时需在引物5'端分别添加上________ 基因两端的同源序列。
(3)过程③中,需先用________ 处理大肠杆菌,将质粒3导入大肠杆菌的目的是________ 。
(4)筛选导入质粒3的大肠杆菌时需在培养基中添加________ 。如图是对转化菌落进行PCR验证时的产物电泳结果,泳道________ 对应的菌株可能转化成功。过程⑦中,在含有四环素和X-gal培养基中出现了________ 色菌落,即为筛选出的敲除LacZ基因菌株。
(5)过程⑧通过同源重组技术结合tetr-sac B双重选择系统可对LacZ基因进行回补,筛选LacZ基因回补菌株时应在培养基中添加________ 。
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限制酶 | EcoRⅠ | BamHⅠ | HindⅢ | XmaⅠ |
识识破序列和切割位点 | G↓AATTC | G↓GATCC | A↓AGCTT | C↓CCGGG |
(1)PCR过程除需要加入引物和模板外,还需加入
(2)过程①中,设计两种引物时需在引物5'端分别添加的碱基序列是
(3)过程③中,需先用
(4)筛选导入质粒3的大肠杆菌时需在培养基中添加
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2023/5/29/22092001-9943-413b-a039-4deb0b1fbe2b.png?resizew=312)
(5)过程⑧通过同源重组技术结合tetr-sac B双重选择系统可对LacZ基因进行回补,筛选LacZ基因回补菌株时应在培养基中添加
通过体内同源重组可以进行靶向基因敲除,原理如图1所示。同源重组技术结合1c1'-sacB双重选择系统可对基因进行敲除与回补,研究基因的功能。图2是科研人员利用该方法对大肠杆菌LacZ基因进行敲除与回补的相关过程,其中tet'是四环素抗性基因,sacB基因是蔗糖致死基因,LacZ基因表达产物能将无色化合物X-gal水解成蓝色化合物。回答下列问题:
(1)据图1分析,与传统转基因技术相比,体内同源重组具有的特点是__________ 。
(2)采用PCR技术扩增目的基因时,在PCR反应体系中需加入引物,引物的作用是_______ ,若目的基因扩增3代,则共用引物________ 个。PCR完成以后,常采用_______ 法来鉴定PCR的产物。
(3)过程①中,设计两种引物时需在引物5'端分别添加______ 、______ 限制酶的识别序列;过程⑤中,设计两种引物时需在引物5'端分别添加_______ 基因两端的同源序列。
(4)过程⑦中,在含有_______ 的培养基中出现了白色菌落,即为筛选出的敲除 LacZ基因菌株。过程⑧通过同源重组技术结合tetr-sacB双重选择系统可对 LacZ 基因进行回补,筛选 LacZ基因回补菌株时应在培养基中添加________ 。
限制酶 | EcoR I | BamH I | HindⅢ | Xma I |
识破序列和切割位点 | 5'—G↓AATTC—3' | 5'—G↓GATCC—3' | 5'—A↓AGCTT—3' | 5'—C↓CCGGG—3' |
(1)据图1分析,与传统转基因技术相比,体内同源重组具有的特点是
(2)采用PCR技术扩增目的基因时,在PCR反应体系中需加入引物,引物的作用是
(3)过程①中,设计两种引物时需在引物5'端分别添加
(4)过程⑦中,在含有
Ⅰ、同源重组技术结合tetr-sacB双重选择系统可对基因进行敲除与回补,研究基因的功能。下图是科研人员利用该方法对大肠杆菌LacZ基因进行敲除与回补的相关过程,其中tetr是四环素抗性基因,sacB基因是蔗糖致死基因,LacZ基因表达产物能将无色化合物X-gal水解成蓝色化合物。请回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2024/3/2/181c2412-1571-4f28-8826-e140def66f0f.png?resizew=607)
(1)过程①PCR中影响退火温度的因素有引物的长度、______ ,若温度过低会导致______ 。
(2)过程①中,设计两种引物时需在引物5'端分别添加的碱基序列是______ 、______ ;过程⑤中,设计两种引物时需在引物5'端分别添加上______ 基因两端的同源序列。
(3)过程⑦中,在含有______ 的培养基中出现了白色菌落,即为筛选出的敲除LacZ基因菌株。过程⑧通过同源重组技术结合tetr-sacB双重选择系统可对LacZ基因进行回补,筛选LacZ基因回补菌株时应在培养基中添加______ 。
Ⅱ、咪唑喹啉衍生物(BEZ)和长春花碱(VLB)用于治疗卵巢癌、肝癌等癌症,为研究二者对肾癌的治疗效果,研究人员进行了系列实验。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2024/3/2/0d430b96-33d1-4804-8090-3f41fe62b1c5.png?resizew=345)
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2024/3/2/168d9ab6-5ed7-49ff-adb6-d6cbafd080ea.png?resizew=449)
(4)探究BEZ和VLB单独及联合使用对肾癌细胞凋亡的影响,结果如图1所示。该实验的自变量是______ ,实验结果表明______ 对癌细胞凋亡无明显影响。
(5)Caspase—3是细胞内促凋亡蛋白,Mcl—1是Caspase—3基因表达的调控因子。为研究BEZ和VLB治疗肾癌的机制,研究人员对各组细胞进行实验处理24小时后,检测Mcl—1的mRNA和蛋白质含量,结果如图2。选用GAPDH作为内参的原因是______ 。
(6)综合图1、图2结果,在下列箭头上标明“+”或“-”(分别表示“促进”和“抑制”),图示药物发挥作用的机理______ 。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2024/3/2/181c2412-1571-4f28-8826-e140def66f0f.png?resizew=607)
限制酶 | EcoRⅠ | BamHⅠ | HindⅢ | XmaⅠ |
识破序列和切割位点 | 5'G↓AATTC3' | 5'G↓GATCC3' | 5'A↓AGCTT3' | 5'C↓CCGGG3' |
(1)过程①PCR中影响退火温度的因素有引物的长度、
(2)过程①中,设计两种引物时需在引物5'端分别添加的碱基序列是
(3)过程⑦中,在含有
Ⅱ、咪唑喹啉衍生物(BEZ)和长春花碱(VLB)用于治疗卵巢癌、肝癌等癌症,为研究二者对肾癌的治疗效果,研究人员进行了系列实验。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2024/3/2/0d430b96-33d1-4804-8090-3f41fe62b1c5.png?resizew=345)
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2024/3/2/168d9ab6-5ed7-49ff-adb6-d6cbafd080ea.png?resizew=449)
(4)探究BEZ和VLB单独及联合使用对肾癌细胞凋亡的影响,结果如图1所示。该实验的自变量是
(5)Caspase—3是细胞内促凋亡蛋白,Mcl—1是Caspase—3基因表达的调控因子。为研究BEZ和VLB治疗肾癌的机制,研究人员对各组细胞进行实验处理24小时后,检测Mcl—1的mRNA和蛋白质含量,结果如图2。选用GAPDH作为内参的原因是
(6)综合图1、图2结果,在下列箭头上标明“+”或“-”(分别表示“促进”和“抑制”),图示药物发挥作用的机理
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