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非选择题-解答题 适中0.65 引用2 组卷276
下图是A基因的部分片段和载体的部分结构,科研人员欲将A基因的启动子连接在图中载体中,进而使载体上的荧光蛋白基因得到表达。图中标记了A基因部分片段和载体部分结构中的限制酶切位点及各种限制酶识别序列及切割位点,回答下列问题:
   
(1)启动子是______的部位。图中R、F表示扩增启动子所用的______
(2)已知A基因的启动子两端没有限制酶识别序列,因此可在F和R的______(填“3'”或“5'”)端分别连接______酶的识别序列,这两种酶的识别序列添加位点______(填“能”或“不能”)交换。
(3)为完成科研人员的设想,除需使用F与R处添加的序列所对应的酶外,扩增启动子和构建基因表达载体的过程还需用到的酶有______
2023·广东深圳·一模
知识点:PCR扩增的原理与过程DNA重组技术的基本工具基因表达载体的构建 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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人类γ基因启动子上游的调控序列中含有BCL11A蛋白结合位点,该位点结合BCL11A蛋白后,γ基因的表达被抑制。通过改变该结合位点的序列,解除对γ基因表达的抑制,可对某种地中海贫血症进行基因治疗。科研人员扩增了γ基因上游不同长度的片段,将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测,以确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置。相关信息如图所示。

   

(1)基因工程中,为了防止插入片段的反向连接,对载体一般采用__________(填“单酶切”或“双酶切”)。将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达,需在引物末端添加限制酶识别序列。据图可知,在F1~F7末端添加的序列所对应的限制酶是________。本实验中,从产物扩增到载体构建完成除使用上述限制酶外,还需使用________酶。
(2)基因表达载体必须含有的组分是________,将构建的载体导入除去BCL11A基因的受体细胞,成功转化后,含F1~F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白,受体细胞有荧光,含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光。含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光的原因是________________
(3)向培养液中添加适量的雌激素,含F1~F4与R扩增产物的受体细胞不再有荧光,而含F5~F6与R扩增产物的受体细胞仍有荧光。若γ基因上游调控序列上与引物序列所对应的位置不含有BCL11A蛋白的结合位点序列,据此结果可推测,BCL11A蛋白结合位点位于________________

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