非选择题-解答题 适中0.65 引用5 组卷635
我国研发出一种可高效特异地扩增超长DNA的抑制热交错PCR(STIPCR)。STIPCR通过在正/反向引物的5'端引入一段相同的短序列,抑制了较短产物链的扩增,增强了超长DNA的特异性扩增,在延伸阶段使用不同幅度(60~72℃)变温的嵌套热交错方法,解决了某一温度下,因超长DNA不同区域G-C碱基对含量不同而难以高效延伸的问题。回答下列问题:
(1)利用STIPCR从复杂基因组中特异地扩增超长DNA需要根据__________ 来合成引物,并对引物加工处理,STIPCR扩增过程与DNA在细胞中复制过程的相同之处为__________ (答出3点)。
(2)在正/反向引物的5'端引入一段相同的短序列,容易使较短的产物链首尾连接形成茎环结构,原因是__________ ,该结构不能与引物结合,从而使较短产物链停留在PCR过程的__________ 阶段,抑制了非特异性产物的扩增。
(3)为提高超长DNA中G-C碱基对含量低的区域链的延伸效率,可适当__________ (填“降低”或“升高”)温度,依据是__________ 。
(4)为保证经STIPCR获得的某超长DNA与细胞内的该DNA遗传信息相同,需用限制酶处理所得DNA,其目的是去除__________ ,若要使获得的超长DNA在大肠杆菌中表达,需要__________ 才能将超长DNA导入细胞。
(1)利用STIPCR从复杂基因组中特异地扩增超长DNA需要根据
(2)在正/反向引物的5'端引入一段相同的短序列,容易使较短的产物链首尾连接形成茎环结构,原因是
(3)为提高超长DNA中G-C碱基对含量低的区域链的延伸效率,可适当
(4)为保证经STIPCR获得的某超长DNA与细胞内的该DNA遗传信息相同,需用限制酶处理所得DNA,其目的是去除
2023·河南·模拟预测
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种子大小是作物重要的产量性状。研究者对野生型拟南芥(2n=10)进行诱变筛选到一株种子增大的突变体。通过遗传分析和测序,发现野生型DAI基因发生一个碱基G到A的替换,突变后的基因为隐性基因,据此推测突变体的表型与其有关,开展相关实验。回答下列问题:
(1)拟采用农杆菌转化法将野生型DAI基因转入突变体植株,若突变体表型确由该突变造成,则转基因植株的种子大小应与________ 植株的种子大小相近。
(2)用PCR反应扩增DAI基因,PCR扩增时,需在_________ 催化下,在引物__________ 端进行DNA链的延伸,获得扩增产物用于测序。
(3)热启动PCR可提高扩增效率,方法之一是:先将除TaqDNA聚合酶(Taq酶)以外的各成分混合后,加热到80℃以上再混入酶,然后直接从94℃开始PCR扩增,下列叙述正确的有_________
(4)转化后,T-DNA(其内部基因在减数分裂时不发生交换)可在基因组单一位点插入也可以同时插入多个位点。在插入片段均遵循基因分离及自由组合定律的前提下,选出单一位点插入的植株,并进一步获得目的基因稳定遗传的植株(如图),用于后续验证突变基因与表型的关系。__________ 。
②T1代阳性植株自交所得的T2代种子按单株收种并播种于选择培养基,选择阳性率约_________ %的培养基中幼苗继续培养。
③将②中选出的T2代阳性植株_________ (填“自交”、“与野生型杂交”或“与突变体杂交”)所得的T3代种子按单株收种并播种于选择培养基,阳性率达到__________ %的培养基中的幼苗即为目标转基因植株。
(1)拟采用农杆菌转化法将野生型DAI基因转入突变体植株,若突变体表型确由该突变造成,则转基因植株的种子大小应与
(2)用PCR反应扩增DAI基因,PCR扩增时,需在
(3)热启动PCR可提高扩增效率,方法之一是:先将除TaqDNA聚合酶(Taq酶)以外的各成分混合后,加热到80℃以上再混入酶,然后直接从94℃开始PCR扩增,下列叙述正确的有_________
A.Taq酶最适催化温度范围为50~60℃ |
B.与常规PCR相比,热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物 |
C.两条子链的合成一定都是从5'端向3'端延伸 |
D.PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了Taq酶的特异性 |
(4)转化后,T-DNA(其内部基因在减数分裂时不发生交换)可在基因组单一位点插入也可以同时插入多个位点。在插入片段均遵循基因分离及自由组合定律的前提下,选出单一位点插入的植株,并进一步获得目的基因稳定遗传的植株(如图),用于后续验证突变基因与表型的关系。
①农杆菌转化T0代植株并自交,将T1代种子播种在选择培养基上,能够萌发并生长的阳性个体即表示其基因组中插入了
②T1代阳性植株自交所得的T2代种子按单株收种并播种于选择培养基,选择阳性率约
③将②中选出的T2代阳性植株
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