胰蛋白酶抑制剂能干扰昆虫的代谢，引起昆虫死亡，但对人体无害。科学家将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因（Pin－Ⅱ）通过农杆菌导入杨树细胞，培育成了抗虫杨树。

注：左图表示含目的基因的DNA分子，下图表示质粒，图中Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，Neo^r表示新霉素抗性基因，复制原点是质粒DNA复制的起点。箭头表示识别序列完全不同的4种限制酶的酶切位点。
回答下列问题：
(1)要获得大量的目的基因，通常采用PCR扩增技术，在PCR扩增仪中已加入了一定的缓冲溶液、含目的基因的DNA分子、Mg^2＋，还需要加入的物质有_________。通过PCR技术扩增Pin－Ⅱ基因片段，反应过程一般由95℃热变性、55～60℃引物和模板配对、72℃延伸三个步骤，经过多次循环完成。延伸阶段选用72℃而非95℃综合考虑了两个因素，这两个因素是________和________。
(2)图中的质粒在基因工程操作中通常用作载体，能在受体细胞内稳定存在，除含有Amp^r，Neo^r和多个限制酶切位点外，质粒还具有的主要特点是________。
(3)依据图中信息，写出高效构建含Pin－Ⅱ基因片段的重组质粒的简要操作方法：_________。
(4)用转基因杨树叶片喂养某种杨树害虫，发现害虫死亡率显著增加，与非转基因的杨树细胞相比较，此转基因杨树的叶片细胞中，可以检测到的物质有_____、____、____。（写3项）