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非选择题-解答题 较难0.4 引用1 组卷523
研究人员以拟南芥为实验材料开展遗传研究时,发现拟南芥细胞中存在着9—顺式—环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)基因、转录因子NGA1基因等与抗旱性状相关的基因,将上述基因通过基因工程转入水稻细胞内,获得了抗旱性较强的水稻新品种。
(1)为探索与干旱诱导相关的基因,研究人员做了如下探究:将野生型拟南芥进行干旱处理,发现叶片中脱落酸(ABA)含量增高,气孔开度减小,水分散失减少。继续探究发现,NCED是ABA合成过程中的关键酶,NCED基因超量表达的拟南芥抗旱性明显增强。已知NGA1基因的表达产物可作用于NCED基因的启动子,NGA1基因敲除突变体植株对干旱敏感。推测NGA1基因参与植物抗旱的机理是______
(2)为实现在不破坏拟南芥细胞结构的基础上通过PCR技术原位扩增NCED基因,科研人员先通过化学固定保持细胞的形态结构,然后借助膜结构的通透性,使_______(PCR扩增时需要的成分)进入细胞核中,以NCED基因为模板进行原位扩增。若要通过原位扩增的方式获得大量NCED基因对应的cDNA,则应在固定细胞形态结构后,先使DNA酶进入细胞核中发挥作用,然后以NCED基因转录出的mRNA为模板合成cDNA,再进一步扩增获得大量cDNA.上述过程中先使用DNA酶处理的原因是_______
(3)用农杆菌转化法将NCED基因转入水稻细胞时,需先将NCED基因插入到______,该过程需用两种限制酶同时切割NCED基因和运载体,目的是______。将重组质粒转入农杆菌,再将含重组质粒的农杆菌与取自新鲜水稻的圆形小叶片共培养,控制培养基中______(填激素)的使用比例,通过植物组织培养获得多株转基因水稻。欲通过对照实验的方法在个体水平上判断转基因技术成功与否,实验设计思路是______
2023·山东威海·一模
知识点:PCR扩增的原理与过程将目的基因导入受体细胞植物组织培养技术综合基因的表达综合 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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拟南芥(2N=10)属于十字花科植物,自花传粉,被誉为“植物界的果蝇”,广泛应用于植物遗传学研究。拟南芥细胞中存在某种转录因子能够明显提高其他基因的表达水平。研究人员将从拟南芥细胞中获取的转录因子转移到大豆细胞内,并使其过量表达,发现大豆中油酸和亚油酸的含量显著提高。图中限制酶EcoRⅤ的酶切位点为-GATATC-。

(1)质粒P0具有氨苄青霉素抗性基因(ampr)和四环素抗性基因(tetr),对其进行切割时应该注意_______________________________________________________________________,以便筛选重组质粒。研究人员利用限制酶EcoRⅤ对载体进行处理后________(填“能”或“不能”)与目的基因片段直接相连。用限制酶和T4DNA连接酶构建基因表达载体时,研究人员常选用能产生黏性末端的限制酶,你认为这样做的理由是____________________________________________________

(2)P3质粒导入受体细胞通常使用农杆菌转化法,若受体细胞能够表现氨苄青霉素抗性,能否说明目的基因已成功导入受体细胞,并说出理由:_______________________________
(3)受体细胞能够培育出转基因大豆植株的原因是____________________________
(4)为了获得大量的目的基因,可以采用PCR技术进行扩增,PCR技术依据的原理是__________________。PCR过程每次循环分为3步,其中温度最低的一步是______。PCR扩增完成后,常采用____________________________来鉴定PCR的产物。
(5)某实验利用PCR技术获取目的基因,实验结果显示除目的基因条带(引物与模板完全配对)外,还有2条非特异条带(引物和模板不完全配对)。为了减少反应非特异条带的产生,以下措施中有效的是_______________
A.增加模板DNA的量
B.延长热变性的时间
C.延长延伸的时间
D.提高复性的温度
(6)利用 PCR 技术,在引物的某个特定位点引入一个或多个不能与目的基因配对的碱基,就可以在目的基因中带来定点突变,据此获得的目的基因再经表达、纯化获得蛋白质,该过程属于____________________(填工程技术)的范畴。

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