铀是一种广泛分布在岩石和土壤中的天然放射性元素，铀导致的水体污染越来越受到重视，物理化学处理含铀废水的经济性和有效性低，因而采用耐辐射奇球菌净化成为优先方法。某-组卷网

非选择题-实验题适中0.65 引用1 组卷289

铀是一种广泛分布在岩石和土壤中的天然放射性元素，铀导致的水体污染越来越受到重视，物理化学处理含铀废水的经济性和有效性低，因而采用耐辐射奇球菌净化成为优先方法。某研究小组拟将已连接还原基因dsrA的重组载体pRADK—dsrA转入耐辐射奇球菌DR中，构建兼备高还原性和强辐射抗性的基因工程菌Deino—dsrA，其构建过程如图所示(注：KanR是卡那霉素抗性基因、AmpR是氨苄青霉素抗性基因、ori是复制原点)。四种
限制酶的识别序列及切割位点见表。回答下列问题：

限制酶	BamHI	BssHII	NdeI	SspI
识别序列和切割位点

(1)过程①含dsrA基因的DNA片段时需在反应液中加入一对引物，其作用是_______，对该对引物的设计要求有_______(答出1点即可)。PCR扩增过程中，变性的温度需上升到90℃以上的目的是_______。
(2)过程④要选择合适的限制酶切割含dsrA基因的DNA片段和pRADK质粒，应选用的表中的两种限制酶是_______，不选用其他限制酶的理由是_______，与单酶切相比，采用双酶切的优点有_______。
(3)为成功筛选出成功导入重组pRADK—dsrA载体的耐辐射奇球菌，可用含青霉素的培养基培养该细菌，一段时间后_______(填“保留”或“淘汰”)能存活的细菌即可。

22-23高三上·河南安阳·期末

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知识点：PCR扩增的原理与过程基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定答案解析【答案】很抱歉，登录后才可免费查看答案和解析！

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科研小组利用基因工程技术将“抗虫基因”转入棉花细胞成功培育出抗虫棉，该技术所用的含“抗虫基因”的DNA与质粒上相关限制酶的酶切位点分别如图1、图2所示（不同限制酶的识别序列和酶切位点：BamHⅠ5'-G↓GATCC-3'，BclI5'-T↓GATCA-3'，Sau3AI5'-↓GATC-3'，HindⅢl5'-A↓AGCTT-3'）。请分析并回答下列问题：

(1)通过PCR扩增获得“抗虫基因”时，依据_____设计引物，引物的作用是_____。
(2)培育转基因抗虫棉的核心工作是_____。科研人员分别使用HindⅢ和Sau3AⅠ两种限制酶处理含目的基因的DNA片段，用HindⅢ和BamHⅠ两种限制酶处理质粒，试分析切割质粒时用限制酶BamHⅠ替换Sau3AⅠ的原因_____。
(3)欲确定“抗虫基因”是否表达出“抗虫蛋白”，在分子水平上的检测方法是_____，该方法的原理是_____。
(4)生产上常将转基因抗虫棉与非转基因棉花混合播种，目的是_____。
(5)在基因工程的操作过程中，标记基因在检测目的基因是否导入受体菌方面广泛应用。环丝氨酸辅助筛选法：四环素能使细菌停止生长但不致死；环丝氨酸能使正常生长的细菌致死，而对停止生长的细菌不致死。某质粒如右图所示（Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因），Tet^r中插入目的基因后失活。
用此质粒构建表达载体，转化细菌后，结果有3种：未转化的细菌（无外源DNA进入）、含空质粒（没有连接目的基因的质粒）的细菌、含重组质粒的细菌。
①用含有_____和_____的培养基对上述3种细菌进行筛选，只有含空质粒的细菌被淘汰，理由是_____。
②在上述筛选的基础上，若要筛选出含重组质粒的细菌，还需使用含有_____的培养基。

转基因重组酵母乙肝疫苗是一种乙肝表面抗原（HBsAg）亚单位疫苗。巴斯德华赤酵母是一种甲醇营养型酵母，能以甲醇作为唯一碳流，该酵母是组氨酸脱氢酶基因（His）缺失突变体。不能催化组氨酸生物合成反应。下图所示质粒中的5'AOX1、3'AOXI（TT）是强启动子序列和终止子序列，请回答下列问题。

注：HBsAg基因中的箭头表示基因转录的方向。
限制酶的识别序列和切割位点

限制酶	SnaB I	BglⅡ	AvrⅡ	Sac I
识别序列及切割位点	TAC↓GTA	A↓GATCT	C↓CTAGG	C↓TCGAG

(1)图示质粒中含有的卡那霉素抗性基因kan^r、氨苄青霉素抗性基因amp^r在基因工程中一般作为__________，有利于重组质粒的筛选。质粒中需具有多个限制酶切割位点。其作用是________________。
(2)据图和表分析，构建重组质粒时，需选择图中的__________限制酶切割质粒，其优点为__________。
HBsAg基因的B位置需接上___________（填相应末端的碱基序列）。经过限制酶酶切的质粒与HBsAg基因在进行连接时，可选用___________连接
(3)图中步骤1一般先用Ca²⁺处理大肠杆菌，使其处于_________的生理状态。由步骤2的结果分析，步骤1将重组质粒先导入大肠杆菌有利于HBsAg基因在受体细胞中_________。
(4)以巴斯德毕赤酵母细胞为受体，步骤3中应选用限制酶_________切割从大肠杆菌中分离的重组质粒，从而获得图示重组DNA片段，然后将其整合到酵母细胞基因组中，在不含_________的培养基中筛选出成功导入了HBsAg基因的酵母细胞。
(5)转化成功的巴斯德毕赤酵母在培养基上培养一段时间后，需向培养基中加入__________以维持其生活。与细菌相比，酵母菌更适宜作为受体细胞制备HBsAg亚单位疫苗，原因是_________。

通过基因工程技术能大量生产人生长激素。图1所示为人工构建的大肠杆菌质粒pBR322，是由三种质粒经复杂重组过程而构建。其上含氨苄青霉素抗性基因（Amp^r）、四环素抗性基因（Tet^r）。表为相关限制酶的识别序列和酶切位点。请回答下列问题：

限制酶	Pst I	EeoR I	HindⅢ
识别序列及切割位点

(1)人工构建pBR322质粒需要的酶有________________________。
(2)生产生长激素需从人垂体细胞中提取mRNA，逆转录得到DNA，以该DNA为________________________进行大量复制，获得相应的目的基因。
(3)为了构建重组质粒，采用PstI、EcoRI处理目的基因和质粒，与只用PstI处理相比，这样操作的优势是：_______________________________________________________________________________。将构建的重组质粒导入大肠杆菌后，为了排除普通大肠杆菌（无pBR322质粒）、空质粒大肠杆菌（含pBR322质粒但没有目的基因）的干扰，进行了进一步检测。配制甲、乙两种培养基，甲培养基含四环素，乙培养基含四环素和氨苄青霉素。含目的基因的大肠杆菌在甲培养基上________________________（填“能”或“不能”）生存，在乙培养基上________________________（填“能”或“不能”）生存。
(4)导入受体细胞后，常用________________________技术检测生长激素在大肠杆菌中是否成功表达。
(5)基因工程的应用十分广阔，可用转基因牛制作乳腺生物反应器，从乳汁中提取药物，则该操作过程中选择的受体细胞是________________，原因是____________。

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