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非选择题-解答题 适中0.65 引用1 组卷262
将外源多酚氧化酶基因 (POT33) 的同源片段与载体结合,构建反义表达载体,通过基因工程 技术导入马铃薯,产生的反义 RNA 可有效降低马铃薯内源多酚氧化酶基因的表达水平(原理见图 1),从而改善薯块的损伤褐化现象,提高马铃薯的食用和加工品质。图 2 为马铃薯内源多酚氧化酶基因的反义表达载体的结构示意图。回答下列相关问题:

(1)图 1 中的靶 mRNA 与反义 RNA 结合能在__________水平上抑制马铃薯内源多酚氧化酶基因的表达。图 2 中的启动子为特异性启动子,是__________识别和结合的部位,可驱动基因的转录,则该启动子应在马铃薯的________(器官)中启动基因的转录。
(2)获取马铃薯POT33基因的同源片段:根据马铃薯POT33基因的__________ 设计一对特异性引物,在引物的5'端加入限制性内切核酸酶的________________ 以满足 目 的基因连接到载体的需要,再通过PCR获取马铃薯POT33基因的同源片段。
(3)有人认为酸性溶液可能会抑制多酚氧化酶的活性,某同学设计了如下实验方案进行探究,请完善实验方案。
①实验材料:新鲜马铃薯若干、pH 为 1.7 的缓冲液、清水、恒温设备等。
②实验步骤:
将同种的新鲜马铃薯随机均分为两组,其中A 组加__________,B 组加等量清水,两组都在 __________ (填“常温”或“低温”) 条件下保存;
③实验结果和结论:
a.___________________
b.____________________
22-23高三上·湖北·期末
知识点:PCR扩增的原理与过程基因表达载体的构建基因工程在农牧业、制药及环境等方面的应用验证性实验与探究性实验 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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回答下列(一)、(二)小题:
(一)为了探究微生物在不同条件下的繁殖速度,微生物的计数是发酵工程中不可或缺的环节。回答下列问题:
(1)测定微生物细胞数量的方法很多,通常采用的有稀释涂布平板法和显微镜计数法,前者往往无法进行动物细胞数量的测定,原因是____________________________________;显微镜计数法计数结果一般比稀释涂布平板法大,可能的原因是____________________________________
(2)在用显微镜进行酵母菌细胞计数时,必须将菌液____________,然后________________(①盖专用盖玻片;②滴加酵母菌悬液;按操作的先后顺序填写序号),已知血细胞计数板规格为1mm1mm0.1mm,在培养后期对培养液稀释100倍后,用显微镜观察到其中某方格中酵母菌的分布情况如图,若最终几个样方中平均数与其相同,则培养液中酵母菌的密度为________个/毫升。

(3)稀释涂布平板时,若平板中菌落数过少,随机误差增大。要解决这个问题可以从两方面入手:一是保证能准确计数的前提下降低稀释度;二是将相同稀释度下的多组数值取平均值后再进行计算。除用于计数,稀释涂布平板还能实现对目标微生物的____________
(二)将外源多酚氧化酶基因(POT33)的同源片段与载体结合,构建反义表达载体,通过基因工程技术导入马铃薯,产生的反义RNA可有效降低马铃薯内源多酚氧化酶基因的表达水平,从而改善薯块的损伤褐化现象,提高马铃薯的食用和加工品质。回答下列相关问题:
(4)获取马铃薯POT33基因的同源片段:根据马铃薯POT33基因的____________________设计一对特异性引物,在引物的5'端加入限制性内切核酸酶的____________以满足目的基因连接到载体的需要,再通过PCR获取马铃薯POT33基因的同源片段。
(5)构建重组载体:用限制性内切核酸酶分别处理____________________________________,处理过程中用两种限制酶,可以防止目的基因以及载体的________________,保证 POT33基因同源片段与载体的反向连接,形成反义表达载体。
(6)马铃薯转化、选择及再生:以马铃薯无菌苗的叶片为外植体,一般可借助________________实现马铃薯的遗传转化,再将被转化的叶片放在含抗生素的培养基上培养,加入的抗生素具有筛选转化细胞的双重作用;之后对脱分化形成的愈伤组织每隔适当时间进行________培养,后可通过调控培养基中________________________以获得符合要求的再生植株。

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