非选择题-解答题 较难0.4 引用1 组卷676
Bt抗虫蛋白具有抵抗虫害的作用。为获取大量B抗虫蛋白,研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列(简称Bt-Cry1基因),如图1所示;通过基因工程技术利用大肠杆菌表达该蛋白,所用载体如图2所示,箭头表示不同限制酶的酶切位点。
回答下列问题:
(1)为获取B-Cry1基因,提取苏云金杆菌的总RNA,再经_____________ 过程得到cDNA,将其作为PCR反应的模板,并设计_____________ 种特异性引物来扩增目的基因。
(2)根据图中信息,可选用____________ 两种限制酶切割含目的基因的DNA片段和载体,使目的基因与载体高效重组,若选用PstI进行切割,会造成_____________ 。限制酶来源于原核生物,不会切割本身的DNA分子是因为____________ 。
(3)基因表达载体中必须含有启动子和终止子,其中启动子的作用是_____________ 。
(4)导入目的基因时,首先用____________ 处理大肠杆菌使其成为能吸收周围环境中DNA分子的生理状态的细胞,再将重组载体溶于缓冲液中与受体细胞混合;在一定的温度下可以促进大肠杆菌完成____________ 过程。
(5)检测和鉴定目的基因是否在大肠杆菌中稳定维持和表达的方法有____________ 。
回答下列问题:
(1)为获取B-Cry1基因,提取苏云金杆菌的总RNA,再经
(2)根据图中信息,可选用
(3)基因表达载体中必须含有启动子和终止子,其中启动子的作用是
(4)导入目的基因时,首先用
(5)检测和鉴定目的基因是否在大肠杆菌中稳定维持和表达的方法有
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PHB2蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因, 研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列(简称phb2基因),利用大肠杆菌表达该蛋白。回答下列问题:
(1)为获取phb2基因,提取该动物肝脏组织的________ ,再经________ 过程得到cDNA,将其作为PCR反应的模板, 并设计一对特异性引物来扩增目的基因。与生物体内的DNA聚合酶相比,PCR技术中所用的DNA聚合酶特点是________ 。
(2)图为所用载体图谱示意图,质粒DNA含有启动子,启动子是________ 识别并结合的位点。质粒DNA分子上有复制原点,可以保证质粒在受体细胞中能________ 。
注:箭头表示切割位点
(3)构建基因表达载体需要用到限制酶和DNA连接酶,其中,DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是________ 。图1中限制酶的识别序列及切割位点见表,为使phb2基因(该基因序列不含图中限制酶的识别序列)与载体正确连接,在扩增的phb2基因两端分别引入________ 和________ 两种不同限制酶的识别序列。经过这两种酶酶切的phb2基因和载体进行连接时,可选用________ (填“E·coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”)。
(4)转化前需用________ 处理大肠杆菌细胞,使其处于________ ,以提高转化效率。将转化后的大肠杆菌接种在含________ 的培养基上进行培养。
(1)为获取phb2基因,提取该动物肝脏组织的
(2)图为所用载体图谱示意图,质粒DNA含有启动子,启动子是
名称 | 识别序列及切割位点 | 名称 | 识别序列及切割位点 |
HindⅢ | A↓AGCTT | EcoRI | G↓AATTC |
PvitⅡ | CAG↓CTG | PstI | CTGC↓AG |
KpnI | G↓GTACC | BamHI | G↓GATCC |
(3)构建基因表达载体需要用到限制酶和DNA连接酶,其中,DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是
(4)转化前需用
PHB2蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因,研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列(简称phb2基因),大小为0.9kb(1kb=1000碱基对),利用大肠杆菌表达该蛋白。回答下列问题:
相关限制酶的识别序列及切割位点
注:箭头表示切割位点
(1)为获取phb2基因,提取该动物肝脏组织的总RNA,再经___________ 过程得到cDNA,将其作为PCR反应的模板,并设计一对特异性引物来扩增目的基因。
(2)图1为所用载体图谱示意图,图中限制酶的识别序列及切割位点见表。为使phb2基因(该基因序列不含图1中限制酶的识别序列)与载体正确连接,在扩增的phb2基因两端分别引入___________ 和___________ 两种不同限制酶的识别序列,为此需要将两种酶的识别序列分别设计在两种引物的___________ 端(填5’或3’)。经过这两种酶酶切的phb2基因和载体进行连接时,可选用___________ (填“E.coli”或“T4”)DNA连接酶。
(3)转化前需用___________ 处理大肠杆菌细胞,使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,以提高转化效率。
(4)将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养,随机挑取单菌落(分别编号为1、2、3、4)培养并提取质粒,用(2)中选用的两种限制酶进行酶切,酶切产物经电泳分离,结果如图2,___________ 号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。
相关限制酶的识别序列及切割位点
名称 | 识别序列及切割位点名称 | 名称 | 识别序列及切割位点 |
Hind Ⅲ | EcoR I | ||
PvuⅡ | Pst I | ||
Kpn I | BamH I |
注:箭头表示切割位点
(1)为获取phb2基因,提取该动物肝脏组织的总RNA,再经
(2)图1为所用载体图谱示意图,图中限制酶的识别序列及切割位点见表。为使phb2基因(该基因序列不含图1中限制酶的识别序列)与载体正确连接,在扩增的phb2基因两端分别引入
(3)转化前需用
(4)将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养,随机挑取单菌落(分别编号为1、2、3、4)培养并提取质粒,用(2)中选用的两种限制酶进行酶切,酶切产物经电泳分离,结果如图2,
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