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非选择题-解答题 较难0.4 引用1 组卷676
Bt抗虫蛋白具有抵抗虫害的作用。为获取大量B抗虫蛋白,研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列(简称Bt-Cry1基因),如图1所示;通过基因工程技术利用大肠杆菌表达该蛋白,所用载体如图2所示,箭头表示不同限制酶的酶切位点。

回答下列问题:
(1)为获取B-Cry1基因,提取苏云金杆菌的总RNA,再经_____________过程得到cDNA,将其作为PCR反应的模板,并设计_____________种特异性引物来扩增目的基因。
(2)根据图中信息,可选用____________两种限制酶切割含目的基因的DNA片段和载体,使目的基因与载体高效重组,若选用PstI进行切割,会造成_____________。限制酶来源于原核生物,不会切割本身的DNA分子是因为____________
(3)基因表达载体中必须含有启动子和终止子,其中启动子的作用是_____________
(4)导入目的基因时,首先用____________处理大肠杆菌使其成为能吸收周围环境中DNA分子的生理状态的细胞,再将重组载体溶于缓冲液中与受体细胞混合;在一定的温度下可以促进大肠杆菌完成____________过程。
(5)检测和鉴定目的基因是否在大肠杆菌中稳定维持和表达的方法有____________
2023·云南昆明·模拟预测
知识点:DNA重组技术的基本工具基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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PHB2蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因, 研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列(简称phb2基因),利用大肠杆菌表达该蛋白。回答下列问题:
(1)为获取phb2基因,提取该动物肝脏组织的________,再经________过程得到cDNA,将其作为PCR反应的模板, 并设计一对特异性引物来扩增目的基因。与生物体内的DNA聚合酶相比,PCR技术中所用的DNA聚合酶特点是________
(2)图为所用载体图谱示意图,质粒DNA含有启动子,启动子是________识别并结合的位点。质粒DNA分子上有复制原点,可以保证质粒在受体细胞中能________

   

名称

识别序列及切割位点

名称

识别序列及切割位点

HindⅢ

A↓AGCTT

EcoRI

G↓AATTC

PvitⅡ

CAG↓CTG

PstI

CTGC↓AG

KpnI

G↓GTACC

BamHI

G↓GATCC

注:箭头表示切割位点
(3)构建基因表达载体需要用到限制酶和DNA连接酶,其中,DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是________。图1中限制酶的识别序列及切割位点见表,为使phb2基因(该基因序列不含图中限制酶的识别序列)与载体正确连接,在扩增的phb2基因两端分别引入________________两种不同限制酶的识别序列。经过这两种酶酶切的phb2基因和载体进行连接时,可选用________(填“E·coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”)。
(4)转化前需用________处理大肠杆菌细胞,使其处于________,以提高转化效率。将转化后的大肠杆菌接种在含________的培养基上进行培养。
PHB2蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因,研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列(简称phb2基因),大小为0.9kb(1kb=1000碱基对),利用大肠杆菌表达该蛋白。回答下列问题:

相关限制酶的识别序列及切割位点
名称识别序列及切割位点名称名称识别序列及切割位点
Hind ⅢEcoR I
PvuⅡPst I
Kpn IBamH I

注:箭头表示切割位点
(1)为获取phb2基因,提取该动物肝脏组织的总RNA,再经___________过程得到cDNA,将其作为PCR反应的模板,并设计一对特异性引物来扩增目的基因。
(2)图1为所用载体图谱示意图,图中限制酶的识别序列及切割位点见表。为使phb2基因(该基因序列不含图1中限制酶的识别序列)与载体正确连接,在扩增的phb2基因两端分别引入______________________两种不同限制酶的识别序列,为此需要将两种酶的识别序列分别设计在两种引物的___________端(填5’或3’)。经过这两种酶酶切的phb2基因和载体进行连接时,可选用___________(填“E.coli”或“T4”)DNA连接酶。
(3)转化前需用___________处理大肠杆菌细胞,使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,以提高转化效率。
(4)将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养,随机挑取单菌落(分别编号为1、2、3、4)培养并提取质粒,用(2)中选用的两种限制酶进行酶切,酶切产物经电泳分离,结果如图2,___________号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。

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