胰蛋白酶抑制剂（TI）可抑制昆虫蛋白酶活性，阻碍昆虫消化蛋白质。盐藻是一种无细胞壁的单细胞真核绿藻，是能在高盐条件下生长的新型生物反应器。研究人员利用基因工程技-组卷网

非选择题-解答题适中0.65 引用3 组卷133

胰蛋白酶抑制剂（TI）可抑制昆虫蛋白酶活性，阻碍昆虫消化蛋白质。盐藻是一种无细胞壁的单细胞真核绿藻，是能在高盐条件下生长的新型生物反应器。研究人员利用基因工程技术构建TI基因的表达载体，并将其导入盐藻细胞中，进行了一系列实验。回答下列问题：
(1)研究人员利用PCR技术特异性地扩增目的基因的前提是需要___________，以便合成引物。PCR过程中温度的控制至关重要，将处理温度控制在90～95℃，是为了___________。
(2)获取目的基因后，为了构建基因表达载体，还需要使用的酶是___________（答出2种）。构建成功的基因表达载体应含有的结构有目的基因、启动子、___________（答出3种）等结构。
(3)研究人员将TI基因导入受体细胞后进行了检测，相关步骤和实验结果如表所示。该检测方法依据的原理是___________。据表分析，该实验结果说明___________。

组别	实验步骤			实验结果
	①	②	③
转基因盐藻（A组）	离心收集三组细胞制备可溶性蛋白质样品	将TI注射到大白兔体内，获取TI 抗体	让TI抗体和样品进行混合检测	有杂交带
非转基因盐藻（B组）				无杂交带
阳性对照组（C组）				有杂交带

22-23高三上·新疆·期末

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知识点：PCR扩增的原理与过程基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定答案解析【答案】很抱歉，登录后才可免费查看答案和解析！

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抗凝血酶Ⅲ是一种药用蛋白，对预防和治疗静脉血栓、心肌梗死、脑血管病变具有重要作用。为了提高抗凝血酶Ⅲ的产量，科研人员设计利用崂山奶山羊乳腺生物反应器制备抗凝血酶Ⅲ，并获得了成功。制作崂山奶山羊乳腺生物反应器的流程如图1所示。回答下列问题：

(1)获取了抗凝血酶Ⅲ基因后，需要通过PCR技术对该基因进行扩增，扩增的原理是______，扩增抗凝血酶Ⅲ基因的过程中一般不需要使用解旋酶，原因是______。
(2)构建基因表达载体时，需要将抗凝血酶Ⅲ基因插入到启动子与______之间，其中启动子的作用是______。
(3)获取重组质粒后，将重组质粒导入受精卵。从崂山奶山羊A的卵巢中获取卵子和从崂山奶山羊B的睾丸中获取精子，其中精子要进行______处理才具备受精的能力。图1中步骤④常用的方法是______。
(4)科研人员通过实验获得三只转基因奶山羊D（甲、乙、丙）。科研人员对甲、乙、丙三只奶山羊和非转基因奶山羊进行了基因检测。检测结果显示非转基因奶山羊体内无抗凝血酶Ⅲ基因，甲、乙、丙三只奶山羊体内均含有抗凝血酶Ⅲ基因。进一步检测抗凝血酶Ⅲ的表达情况，结果如图2所示。

注：图中黑色条带为抗原—抗体杂交带，表示相应蛋白质的存在。M泳道条带为相应标准蛋白所在位置。根据以上信息分析，该检测结果说明______。

BMP15蛋白是由卵母细胞分泌的一种转化生长因子，在卵巢发育过程中起着重要的调节作用。为研究兔BMP15基因在兔繁殖机能的调控机制，科学家进行了相关实验，如图1所示。克隆出新西兰白兔BMP15基因，与Myc基因形成融合基因，构建该基因的真核表达载体，并对产生的BMP15蛋白进行分析，以期为深入研究BMP15基因对卵巢发育的调控机制奠定基础。回答下列问题：

(1)获取目的基因：选取幼龄健康的新西兰白免雌兔，对BMP15基因在各组织中的表达情况进行分析，如图2所示:

由结果可知，应采集新西兰白兔_______组织的RNA，经RT-PCR过程获得大量的BMP15基因。图1中①②③过程用到的酶有_____________________。
(2)PCR步骤为变性—_______—延伸，需要引物参与，引物的作用是_____________________。
(3)重组载体的组成除了图上所示，还应该有_______。
(4)在导入大肠杆菌之前，需要先用_______处理，使其处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。导入后应将受体菌在16℃环境中过夜处理，以完成转化。转化指的是___________________________________。
(5)④步骤应将转化好的菌涂在含有______________的培养基上，获取菌落。可通过抗原—抗体杂交实验，加入Myc蛋白抗体来检测BMP15基因是否表达的机理为___________________________________。
(6)将重组载体pCMV-Myc-BMP15转染到真核细胞HEK293T细胞内，对照组转染pCMV—Myc空载体，收取细胞样品用于检测mRNA水平和蛋白水平的表达效果。见下图：（CON：空质粒转染对照组；OVE：重组质粒转染组。）

分析图示结果可知，与对照组相比，BMP15基因mRNA水平的表达效果_______（填“上升”或“下降”），蛋白水平表达效果_______（填“上升”或“下降”），可以为后续研究奠定基础。

抗凝血酶Ⅲ是一种药用蛋白，对预防和治疗静脉血栓、心肌梗死、脑血管病变具有重要作用。为了提高抗凝血酶Ⅲ的产量，科研人员设计利用崂山奶山羊乳腺生物反应器制备抗凝血酶Ⅲ，并获得了成功。制作崂山奶山羊乳腺生物反应器的流程如图1所示。回答下列问题：

(1)获取抗凝血酶Ⅲ基因后，需要通过PCR技术对该基因进行扩增，该技术的原理是________________，前提是______________________。PCR技术的过程一般包括_______________、________________、子链延伸三个阶段。
(2)获取重组质粒后，将重组质粒导入受精卵。从崂山奶山羊A的卵巢中获取卵子和从崂山奶山羊B的睾丸中获取精子，其中精子要进行________处理才具备受精的能力。图1中步骤⑤是指_________________，该项技术的优势是______________________________。
(3)科研人员通过实验获得三只转基因奶山羊D（甲、乙、丙）。科研人员对甲、乙、丙三只奶山羊和非转基因奶山羊进行了基因检测。检测结果显示非转基因奶山羊体内无抗凝血酶Ⅲ基因，甲、乙、丙三只奶山羊体内均含有抗凝血酶Ⅲ基因。进一步检测抗凝血酶Ⅲ的表达情况，结果如图2所示。

注：图中黑色条带为抗原—抗体杂交带，表示相应蛋白质的存在。M泳道条带为相应标准蛋白所在位置。
根据以上信息分析，该检测结果说明__________________。

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