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非选择题-解答题 较难0.4 引用1 组卷637
(一)饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙，很难被动物吸收利用。若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸收利用的磷酸盐等。以下是科研人员从土壤中分离产植酸酶细菌菌株的过程示意图。

(1)为了解土壤中产植酸酶的细菌数量，取10g土壤加入90mL无菌水，制备成细菌悬液，经_______后，获得细胞密度不同的细菌悬液。若将最后一个试管中的菌液每次吸取0.1ml涂布到三个培养基。一段时间后，菌落数分别是168、175、167个，则10g土壤中含有此菌的菌体数是_______。
(2)制备产植酸酶的细菌菌株初筛平板时，需要将培养基的pH调至_______性，灭菌后须在未凝固的培养基中加入无菌植酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入植酸钙的目的是_______，达到检测菌种分泌植酸酶的能力。实验结果显示A～E五种菌株中，_______是产植酸酶最理想的菌株。
(3)若获得理想的菌株后，按照图示的方法进一步纯化菌种，接种环需要灼烧_______次。最后，若要对该菌种进行长期保存，则需将该菌液与30％已灭菌的_______液体混合在-80℃的冷冻箱中保存。
(二)利用植物修复技术将土壤中的Cd富集到植物体内并收集植物组织器官异地妥善储存，可降低土壤中Cd的含量。为提高植物对Cd污染土壤的修复能力，研究者将酵母液泡Cd转运蛋白(YCF1)基因(图①表示其中已知的一段碱基序列)导入杨树植物细胞。

(4)欲通过PCR技术进行获得YCF1基因，故在配制PCR体系时，可加入下列_______组合作为引物对。
A．5＇-TAAGTTGTCT-3＇和5＇-CTTGGATGAT-3＇
B．5＇-TCTGTTGAAT-3＇和5＇-CTTGGATGAT-3＇
C．5＇-GAACCTACTA-3＇和5＇-ATTCAACAGA-3＇
D．5＇-ATCATCCAAG-3＇和5＇-ATTCAACAGA-3＇
(5)利用农杆菌将YCF1基因导入植物细胞的一般方法是将消毒后的外植体如愈伤组织，在含有_______的溶液中浸泡后，取出并转移至添加_______且包含适当营养物质和植物生长调节剂的MS培养基上进行培养。然后经由愈伤组织表面形成类似种子胚的结构再发育成完整植株的_______途径。同时，研究者进一步获得了转YCF1基因的不育杨树株系，其目的是_______。
(6)为检测YCF1基因是否导入植物细胞，可采用PCR技术对转基因植物株系进行检测。但需先提取待测株系的DNA，为充分溶解DNA，研磨液应含有_______(要求写具体浓度)。再用电泳技术对PCR产物进行鉴定。DNA在琼脂糖凝胶电泳中的移动速率与_______(至少写2点)有关。图②中的1～5是待测植物株系，6是野生型杨树，PC是含目的基因的Ti质粒，MK是DNAMarker，由图②电泳结果可知，_______号杨树株系含有目的基因。
22-23高三上·浙江·阶段练习
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知识点：其他微生物的分离与计数植物组织的培养及基本过程PCR扩增的原理与过程蛋白质的提取和分离的实验操作 答案解析 【答案】很抱歉，登录后才可免费查看答案和解析！
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土壤中富含有机营养和无机营养，可为多种微生物提供生活所需的营养物质，土壤中微生物种类丰富。农业生产中施用的尿素必须由土壤中分解尿素的细菌将其分解后才能被农作物吸收利用，所以，在施用尿素的农田土壤中含有大量分解尿素的细菌。某生物兴趣小组开展了“分离土壤中分解尿素的细菌并进行计数”的实验。请分析回答下列问题。
(1)培养基配方：KH2PO4 1.4 g，Na2HPO4 2.1 g，MgSO4·7H2O 0.2 g，葡萄糖10.0 g，尿素1.0 g，蒸馏水1 000 mL，琼脂，无菌水及调节pH的试剂等。
①该培养基中葡萄糖的作用是___________________，培养基中作为唯一氮源的物质是___________。
②培养基中添加一定量的KH2PO4和Na2HPO4，请分析所起的作用：_______________________(写出2点)。
(2)土壤取样：用铁铲取表层以下3～8 cm的土壤10 g，并装在信封中备用。所用铁铲和信封在使用前都需要________________________。
(3)制备土壤悬液：在酒精灯火焰旁，称取1 g土壤样品，倒入盛有99 mL________________的锥形瓶中，按要求制成10－2 g/mL的土壤悬液。并进行一系列的梯度稀释，获得一系列浓度不同的土壤悬液。
培养基配制及平板制作。
(4)接种：从浓度最低的土壤悬液开始，分别吸取0.1 mL悬液，采用_________________法将其接种到平板表面。在这一步骤中，下列选项不需要的是________________(填序号)。
①酒精灯　②培养皿　③显微镜　④接种环　⑤涂布器
培养与观察，计数菌落。
(5)土壤是地球上最宝贵的资源，人类需要研究、修复与保护好土壤。利用植物修复技术将土壤中的Cd富集到植物体内并收集植物组织器官异地妥善储存，可降低土壤中Cd的含量。为提高植物对Cd污染土壤的修复能力，研究者将酵母液泡Cd转运蛋白基因(YCF1)(图①表示其中已知的一段碱基序列)导入杨树植物细胞。

①欲通过PCR技术进行扩增获得YCF1基因，故在配制PCR体系时，可加入下列___________组合作为引物对。
A．5′——TAAGTTGTCT——3′和5′——CTTGGATGAT——3′
B．5′——TCTGTTGAAT——3′和5′——CTTGGATGAT——3′
C．5′——GAACCTACTA——3′和5′——ATTCAACAGA——3′
D．5′——ATCATCCAAG——3′和5′——ATTCAACAGA——3′
②利用农杆菌将YCF1基因导入植物细胞的一般方法是将消毒后的外植体如愈伤组织，在含有___________溶液中浸泡后，取出并转移至添加___________且包含适当营养物质和植物生长调节剂的MS培养基上进行培养。然后经由愈伤组织表面形成类似种子胚的结构，再发育成完整植株的___________途径。同时，研究者进一步获得了转YCF1基因的不育杨树株系，其目的是___________。
③为检测YCF1基因是否导入植物细胞，可采用PCR技术对转基因植物株系进行检测。但需先提取待测株系的DNA，为充分溶解DNA，研磨液应含有___________ (要求写出具体浓度)。再用电泳技术对PCR产物进行鉴定。DNA在琼脂糖凝胶电泳中的移动速率与___________ (至少写2点)等有关。图②中的1～5是待测植物株系，6是野生型杨树，PC是含目的基因的Ti质粒，MK是DNAMarker，由图②电泳结果可知，___________号杨树株系含有目的基因。
饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙，很难被动物吸收利用。若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸收利用的磷酸盐等。以下是科研人员从土壤中分离产植酸酶细菌菌株的过程示意图。
   
(1)在实验室培养微生物，___________是研究和应用微生物的前提。
(2)为了解土壤中产植酸酶的细菌数量，取10g土壤加入90nL无菌水，制备成细菌悬液，经___________后，获得细胞密度不同的细菌悬液。若将最后一个试管中的菌液每次吸取0.1ml涂布到三个培养基。一段时间后，菌落数分别是168、175、167个，则10g土壤中含有此菌的菌体数是___________个，该方法计数结果往往比实际值偏低，原因是____________。
(3)制备产植酸酶的细菌菌株初筛平板时，需要将培养基的pH调至___________性，该培养基可采用___________法进行灭菌，灭菌后须在未凝固的培养基中加入无菌植酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入植酸钙的目的是____________，达到检测菌种分泌植酸酶的能力。
(4)实验结果显示A～E五种菌株中，____________是产植酸酶最理想的菌株。
饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙，很难被动物吸收利用。若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸收利用的磷酸盐等。以下是科研人员从土壤中分离产植酸酶细菌菌株的过程示意图。
   
(1)在实验室培养微生物，_______是研究和应用微生物的前提。
(2)为了解土壤中产植酸酶的细菌数量，取10g土壤加入90mL无菌水，制备成细菌悬液，经系列梯度稀释后，获得细胞密度不同的细菌悬液。若将最后一个试管中的菌液每次吸取0.1ml涂布到四个培养基。一段时间后，菌落数分别是17、168、175、167个，则10g土壤中含有此菌的菌体数是_______个。
(3)制备产植酸酶的细菌菌株初筛平板时，需要将培养基的pH调至_______，该培养基可采用_______法进行灭菌，灭菌后须在未凝固的培养基中加入无菌植酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入植酸钙的目的是_______，达到检测菌种分泌植酸酶的能力。
(4)实验结果显示A~E五种菌株中，_______是产植酸酶最理想的菌株，依据是_______。

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