当地时间2022年1月7日，马里兰大学医学院团队表示对一名患有晚期心脏病的57岁男子实施了全球首例猪心脏移植手术。事实上，这颗猪心脏并非完全是传统意义上的猪的心脏，而是经过了基因编辑的心脏。马里兰大学医学中心表示，他们在供体猪中进行了10个独特的基因编辑敲掉了3个会引发免疫排斥反应的猪的基因和1个会导致心脏组织过度生长的猪的基因，并插入了6个来自人类的基因。用重组DNA技术可以赋予猪新的遗传特性，创造出更符合人类需要的生物产品。回答下列问题：

(1)在此过程中需要使用多种工具酶，其中4种限制酶的切割位点如图所示：常用的DNA连接酶有E.coliDNA连接酶和T₄DNA连接酶。上图中______酶切割后的DNA片段可以用E.coliDNA连接酶连接。上图中______酶切割后的DNA片段可以用T₄DNA连接酶连接。DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是______。
(2)DNA重组技术中所用的质粒载体具有一些特征，如质粒DNA分子上有复制原点，可以保证质粒在受体细胞中能______；质粒DNA分子上有______，便于外源DNA插入；质粒DNA分子上有标记基因，如某种抗生素抗性基因，利用抗生素可筛选出含质粒载体的宿主细胞，方法是____________。
(3)如果要在短时间内获得较多的目的基因，通常采用______技术，该技术的原理是______。在操作步骤中需要加热至90～95℃使__________________，然后降温至55～65℃，其目的是____________。
(4)如果检测发现目的基因随质粒被成功导入了受体细胞，但却没有检测到目的基因相对应的蛋白质，应考虑位于目的基因首端的______和末端的______是否设计好，并从这方面进行改善。