蓝细菌中的ictB蛋白能高效转运和浓缩CO2从而提高细胞光合速率。我国科学家构建了叶片特异性启动子Cab（叶绿体捕光色素蛋白Cab基因启动子）驱动的蓝细菌ict-组卷网

非选择题-解答题较难0.4 引用3 组卷650

蓝细菌中的ictB蛋白能高效转运和浓缩CO₂从而提高细胞光合速率。我国科学家构建了叶片特异性启动子Cab（叶绿体捕光色素蛋白Cab基因启动子）驱动的蓝细菌ictB基因表达载体，并通过农杆菌转化法获得了转ictB基因水稻，大大提高了水稻的产量。在ictB基因载体的构建中，含Cab启动子和ictB基因的重组DNA分子和Ti质粒的酶切位点如图1所示。请回答下列问题：

(1)为使重组DNA分子能定向插入T-DNA中，可用PCR的方法在重组DNA分子两端添加限制酶识别序列，据图可知，M端添加的序列所对应的限制酶是_____，N端添加的序列所对应的限制酶是_____。经过酶切的重组DNA分子和Ti质粒进行连接时，可选用_____（填“E.coliDNA连接酶”或“T4 DNA连接酶”）。添加了限制酶识别序列的重组DNA分子与Ti质粒的重组过程共需要_____种酶。
(2)将农杆菌液浸泡过的水稻愈伤组织进行植物组织培养，培养基中需加入_____进行筛选，最终获得多个水稻株系a1、a2、a3、a4．对a1～a4四个水稻株系的ictB蛋白表达量进行测定，结果如图2，其中a4株系ictB蛋白表达量较低的原因可能是_____。检测应选用的植物器官是_____，原因是_____。

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知识点：基因表达载体的构建目的基因的检测与鉴定答案解析【答案】很抱歉，登录后才可免费查看答案和解析！

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甜蛋白是一种高甜度的特殊蛋白质，为了改善黄瓜的品质，科学家利用农杆菌转化法将一种甜蛋白基因成功导入黄瓜细胞，得到了转基因植株。下图1、图2分别为甜蛋白基因编码链（仅示部分碱基）和Ti质粒的示意图，其中①～⑤表示不同位点。请回答问题：

(1)甜蛋白基因启动子序列和终止密码子的编码序列分别位于图1的________________、________________区。启动子的功能是________________。
(2)通过PCR技术大量扩增甜蛋白基因的编码区序列，需要设计一对引物，则引物序列为________________、________________。
(3)下表为不同限制酶的作用位点，在构建甜蛋白基因表达载体时，应选用的限制酶是________________。

限制酶	识别序列和切割位点
BamHⅠ	5'G↓GATCC3'
PstⅠ	5'C↓TGCAG3'
XhoⅠ	5'C↓TCGAG3'
XbaⅠ	5'T↓CTAGA3'

(4)科研人员对载体Ti质粒进行改造时，需要插入多个限制酶单一切点，应选择在图2中的位点________________（填序号）处插入。
T-DNA的作用是将甜蛋白基因导入黄瓜细胞并________________。
(5)构建好的表达载体需先转入________________后再转化黄瓜细胞，转化后应在培养基中添加________________，筛选转化成功的愈伤组织。经组织培养，获得A、B两个黄瓜品系并对其甜蛋白表达量进行测定，结果如图3。与品系A相比，品系B的甜蛋白表达量较低，最可能的原因是________________。

甜玉米与普通玉米相比，甜玉米中可溶性糖向淀粉的转化较慢，含可溶性糖量高，汁多质脆，富含多种维生素。为了使甜玉米更富有生产应用价值，科研人员通过转基因技术培育出了超量表达P蛋白转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图所示。
说明：强启动子是一段有特殊结构的DNA片段；BamHI、HindⅢ、EcoRI、NotI、SacI代表不同的限制酶；T-DNA是农杆菌的Ti质粒上的DNA片段。

(1)为了特异性扩增P基因序列，可采用___________的方法，一般要加入的原料为___________。
(2)强启动子是一段有特殊结构的DNA片段，能被___________识别并结合，驱动基因的持续转录。
(3)构建能超量表达P基因的载体，需选用___________限制酶的组合和DNA连接酶。将重组Ti质粒转入农杆菌，需先将农杆菌用___________处理。
(4)将玉米愈伤组织经农杆菌液浸泡，超量表达P基因会随T-DNA___________，从而获得转基因植物细胞。继而进行植物组织培养，培养基中需加入___________进行筛选，筛选出的愈伤组织经___________过程形成丛芽，然后在___________（填激素名称）较多的培养基上形成根，最终获得多个玉米株系。发现某株系的P蛋白表达量较低，请对该现象作出合理的解释：______________________。

与普通玉米相比，甜玉米中可溶性糖含量高，汁多质脆，富含多种维生素，更富有生产应用价值。科研人员通过转基因技术培育出了超量表达P蛋白的转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图1所示，P蛋白在玉米株系的表达量如图2所示。回答下列问题：

(1)在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图1所示。图1中强启动子是一段有特殊结构的DNA片段，能被_______________酶识别并结合，驱动基因的持续转录。为使P基因在玉米植株中超量表达，应优先选用图1所示的_________________酶组合，将含P基因的DNA片段和Ti质粒切开后构建重组表达载体。
(2)将农杆菌液浸泡过的玉米愈伤组织进行植物组织培养，培养基中应加入____________以筛选出成功导入T-DNA的玉米愈伤组织。筛选出的愈伤组织经过______________过程可形成丛芽，最终获得多个玉米株系。现对a₁、a₂、a₃、a₄四个甜玉米株系的蛋白质表达量进行测定，结果如图2。其中a₄株系P蛋白表达量较低的原因可能是_________。
(3)研究人员发现了一种RNA剪接抑制剂，该抑制剂会使玉米相关基因的表达受阻。针对该抑制剂的具体作用，科研人员提出以下假说：
假说1：该抑制剂导致RNA前体上内含子1的对应序列不能被剪。
假说2：该抑制剂导致RNA前体上内含子1和外显子2的对应序列同时被剪切。

为了验证上述假说，需分别从实验组和对照组胚细胞中提取RNA，经过_____________过程形成cDNA，然后对cDNA进行PCR后，再分析电泳后的条带。若要证明假说2成立，需要选择图3中所示的引物________________（填数字）进行PCR。

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