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非选择题-解答题 较难0.4 引用1 组卷298
乳酸菌是乳酸的传统生产菌,但耐酸能力较差,影响产量。酿酒酵母耐酸能力较强,但不产生乳酸。研究者将乳酸菌的乳酸脱氢酶基因(LDH)导入酿酒酵母,获得能产生乳酸的工程菌株。下图为构建表达载体时所需的关键条件。

(1)据分析,利用PCR技术扩增LDH需要根据已知部分碱基序列设计引物,设计引物时应注意___________,扩增n次后,需要的引物的数量至少是___________个。研究发现,真核生物起始密码子序列偏好AUG,为保证扩增出的LDH以正确方向插入质粒需要利用双酶切技术,设计引物1的5'端序列时,应考虑___________
(2)LDH的PCR产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定,在凝胶中LDH的迁移速率与___________有关,凝胶中LDH经过染色后可以利用波长300m的紫外灯检测。如果电泳的结果不止一条条带,其可能的原因是______________________
(3)为了筛选出含重组质粒的酿酒酵母应该选择的标记基因为___________,原因是___________,请简单描述其筛选的思路:___________
21-22高三下·山东日照·阶段练习
知识点:PCR扩增的原理与过程蛋白质分离的原理及方法基因表达载体的构建目的基因的检测与鉴定 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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乳酸菌是乳酸的传统生产菌,但耐酸能力较差,影响产量。酿酒酵母耐酸能力较强,但不产生乳酸。研究者将乳酸菌的乳酸脱氢酶基因(LDH)导入酿酒酵母,获得能产生乳酸的工程菌株。下图1为乳酸和乙醇发酵途径示意图,图2为构建表达载体时所需的关键条件。

(1)乳酸脱氢酶在转基因酿酒酵母中参与厌氧发酵的场所应为___________
(2)获得转基因酿酒酵母菌株的过程如下:
①设计引物扩增乳酸脱氢酶编码序列。
为使扩增出的序列中编码起始密码子的序列由原核生物偏好的GTG转变为真核生物偏好的ATG,且能通过双酶切以正确方向插入质粒,需设计引物1和2。其中引物1的5′端序列应考虑______________________
②将上述PCR产物和质粒重组后,导入大肠杆菌,筛选、鉴定,扩增重组质粒。重组质粒上有____________,所以能在大肠杆菌中扩增。启动子存在物种特异性,易被本物种的转录系统识别并启动转录,因此重组质粒上的乳酸脱氢酶编码序列___________(能/不能)在大肠杆菌中高效表达。
③提取重组质粒并转入不能合成尿嘧啶的酿酒酵母菌株,在___________的固体培养基上筛选出转基因酿酒酵母,并进行鉴定。
(3)以葡萄糖为碳源,利用该转基因酿酒酵母进行厌氧发酵,结果既产生乳酸,也产生乙醇。若想进一步提高其乳酸产量,下列措施中不合理的是___________(单选)。
A.进一步优化发酵条件B.使用乳酸菌LDH基因自身的启动子
C.敲除酿酒酵母的丙酮酸脱羧酶基因D.对转基因酿酒酵母进行诱变育种
乳酸菌是乳酸的传统生产菌,但耐酸能力较差,影响产量。酿酒酵母耐酸能力较强,但不产生乳酸。研究者将乳酸菌的乳酸脱氢酶基因(LDH)导入酿酒酵母,获得能产生乳酸的工程菌株。下图为构建表达载体时所需的关键条件,图中XbaI、BamHI分别表示限制酶XbaI、BamHI的识别序列。

(1)获得转基因酿酒酵母菌株的过程如下:
①设计引物扩增乳酸脱氢酶编码序列。在PCR扩增过程中引物在__________阶段与模板结合。为使扩增出的序列编码起始密码子的序列由原核生物偏好的GTG转变为真核生物偏好的ATG,且能通过双酶切以正确方向插入质粒,需设计引物1和2。其中引物1的5′端序列应考虑____________________
②将上述PCR产物和质粒重组后,导入大肠杆菌,筛选、鉴定,扩增重组质粒。重组质粒上有__________,所以能在大肠杆菌中扩增。启动子存在物种特异性,易被本物种的转录系统识别并启动转录,因此重组质粒上的乳酸脱氢酶编码序列__________(填“能”或“不能”)在大肠杆菌中高效表达。
③提取重组质粒并转入不能合成尿嘧啶的酿酒酵母菌株,在__________的固体培养基上筛选出转基因酿酒酵母,并进行鉴定。
(2)为了得到纯培养的酿酒酵母,技术人员进行培养基配制、灭菌、接种、分离和培养。对于培养基灭菌宜采用__________方法;接种时,如果采用__________方法还可以在培养后期对菌落进行计数;值得注意的是,统计的菌落数往往比活菌的实际数目__________

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