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非选择题-解答题 适中0.65 引用1 组卷236
流感是由流感病毒引起的传染病,接种疫苗是预防流感的有效手段。科研工作者研究如何利用流感病毒血凝素(HA)基因制作mRNA疫苗。请回答问题:
(1)流感病毒是RNA病毒,需要先通过__________得到cDNA,再经__________获取HA基因的DNA序列。
(2)为研究非编码序列UTRs()对基因表达的影响,研究者设计了nl、n2、n3三种UTRs,再加入增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因和多个酶切位点,组成DNA片段M,用限制酶__________分别处理M和质粒G,构建下图所示的重组质粒。

(3)将重组质粒导入细菌,大量扩增后,提取质粒,利用Xho I单酶切获得线性DNA,体外条件下加入__________作为原料,合成mRNA,经处理后,与含有某种癌细胞的培养液混合一段时间后,用流式细胞仪检测分析各组EGFP阳性细胞率,结果如下图。

据结果推测,可以采用n3作为疫苗实际生产中的UTRs,理由是__________
(4)用HA基因的DNA序列替换EGFP基因,构建重组质粒,重复(3)的操作和,提取蛋白质进行电泳分离并检测。若__________含量最高,则与(3)的推测相符。
(5)mRNA疫苗进入人体细胞内,其翻译产物将被呈递给不同T细胞,引起机体产生__________(选填下列字母)反应,从而达到预防流感的效果。
A.细胞免疫B.体液免疫
21-22高三上·北京昌平·期末
知识点:免疫学的应用及实例分析基因工程的操作程序综合 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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研究表明来源于大肠杆菌的苏氨酸输出蛋白(由rhtA基因编码)能够识别5-氨基乙酰丙酸,并将其输出至细胞外。为探究苏氨酸输出蛋白对5-氨基丙酸合成的影响,研究人员从大肠杆菌的基因组DNA中扩增出rhtA基因,并构建出相应的重组质粒,获得转rhtA基因的工程菌,其基本操作流程如图所示,已知引物A、B的序列分别是:5'AGGAAACAGACCATGGAATTCATGCCTGGTTCATTACGTAAAATG3'、5'GCCAAGCTTGCATGCCTGCAGTTAATTAATGTCTAATTCTTTTATTTTGCTC3'。

回答下列问题:
(1)由图可知,获取大量rhtA基因要经PCR技术扩增,若要扩增出N个rhtA基因,需要引物A、B各___________个,对引物A的设计要求是__________(答出2点即可)﹔通过过程①得到重组质粒,需选用的两种限制酶是__________,两者起作用部位的化学键是____________
(2)过程②⑤在操作时,一般需用钙离子处理大肠杆菌细胞,使细胞处于一种____________的生理状态。过程③将大肠杆菌体内的质粒提取出来进行验证时,以EeoRI切割pEC-XK99E质粒为对照,分别对重组质粒用EcoRⅠ单酶切、以(1)选用的双酶对重组质粒进行双酶切,然后用电泳技术进行验证,其实验结果如图所示,若2是对照,则3、4分别是单酶切、双酶切的结果,做出此推测的依据是__________

(3)将正确的质粒导入A19后,后续的步骤是___________。本技术选用微生物大肠杆菌作为受体细胞,而不选用动物细胞,理由是___________(答出一点即可)。
丙肝是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的一种病毒性肝炎,其包膜蛋白E1/E2中包含6个保守序列Bp蛋白和抗原表位R9蛋白。而免疫佐剂热敏肠毒素B单位(LTB)是一种免疫增强剂。为研制针对HCV的多肽疫苗,某研究小组拟先构建针对该病毒的多表位疫苗基因的重组质粒,构建流程如图所示。请回答以下问题:
      
(1)获得R9-Bp序列。随着测序技术的发展,可通过检索_____获取R9-Bp的相关序列,用_____制备得到。
(2)通过融合PCR获得LTB-R9-Bp融合序列,该PCR需分两个阶段进行,过程如图所示。阶段一在第_____轮循环即可得到所需的PCR产物,为使产物在阶段二可以通过PCR进行融合,引物R1和F2需包含_____。阶段一的PCR产物可通过电泳鉴定,用荧光染料对LTB的PCR产物进行标记后电泳,得到以下结果,除了目标条带外还有许多非特异性扩增条带,原因可能是_____
A.引物长度太短       B.退火温度过低
C.模板被污染       D.循环次数过多
   
在融合PCR后便可得到LTB-R9-Bp的融合序列,如需大量扩增该序列,可选择引物_____再次进行PCR。
(3)为使目的基因能在大肠杆菌中表达,质粒上除了复制起点、标记基因和多个限制酶的识别序列外,还需加入大肠杆菌的_____。将得到的重组质粒导入低温、低浓度的_____处理的大肠杆菌,完成转化实验,该处理的作用是_____
(4)若利用转基因植物生产该疫苗,首先将目的基因插入农杆菌质粒的_____中,将含重组质粒的农杆菌和经_____处理的外植体在_____(LB/MS)培养基中共培养,再利用_____技术培养成植株,最后可采用_____法检测该植物是否产生多肽抗原。

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