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非选择题-解答题 较易0.85 引用1 组卷90
基因工程重要环节是构建基因表达载体。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列和切割位点，图2表示DNA片段，图3表示目的基因及限制酶切点，图4表示质粒。请回答下列问题：。

（1）限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，切开的位置是图2中编号为______位置的______键。若图2就是图1中的最左边显示的三个碱基对，则④⑤⑥⑦⑧⑨对应的碱基依次是____________。
（2）已知DNA复制子链的延伸方向是5'→3'，图3中的A、B、C、D在不同情况下可以作为引物，在PCR技术中，扩增此目的基因，应该选用______两个作为引物。
（3）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用____________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过______酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入经______处理过的______态的大肠杆菌中。
19-20高二下·吉林长春·期末
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知识点：DNA重组技术的基本工具目的基因的获取基因表达载体的构建 答案解析 【答案】很抱歉，登录后才可免费查看答案和解析！
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基因工程重要环节是构建基因表达载体。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列和切割位点，图2表示DNA片段，图3表示目的基因及限制酶切点，图4表示质粒。请回答下列问题：

（1）若图2就是图1中的最左边显示的三个碱基对，则④⑤⑥⑦⑧⑨对应的碱基依次是_________。限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，切开的位置是图2中编号为______位置的________键。
（2）图3中的A、B、C、D为与目的基因两端配对的四种单链DNA片段，在不同情况下可以作为引物，在PCR技术中，扩增此目的基因，应该选用________两个作为引物。该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生目的基因片段__________个。
（3）图4中，如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对此质粒进行三种方法切割。第一种方法用其中一种酶、第二种方法用其中两种酶、第三种方法用其中三种酶分别切割，依次产生_______、_______、_____三种片段，三种方法总共可以形成________种不同的片段，其中含有完整抗四环素基因的DNA片段有______种。
如表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的切割位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：
限制酶BanHⅠBclⅠSau3AⅠHindⅢ
识别序列及切割位点


（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用___________________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过DNA连接酶的作用形成重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于___________（溶液）处理的大肠杆菌中。
（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，至少需要___________________种培养基。
（3）若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为____________，对该部位，这两种酶___________________（填“都能”“都不能”或“只有一种能”）切开。
（4）假设所用的酶均可将切割位点完全切开，若用Sau3AⅠ和HindⅢ切割图1质粒，可能获得________种大小不同的DNA片段。
（5）获得目的基因后，常采用PCR技术扩增目的基因，在此过程中，需要加入引物的原因是：___________________________________。
基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示质粒。回答下列问题：

（1）用图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，就其特异性而言，切开的是_________之间相连的化学键，该化学键为_________。
（2）采用PCR扩增目的基因的原理是_________。图2中A、B、C、D4种单链DNA片段中，有_________两种引物（DNA复制子链的延伸方向5′→3′）。
（3）在构建目的基因表达载体时，用PstⅠ、EcoRⅠ两种酶同时切割目的基因和质粒，是为了防止一种酶切割时造成_________。不选用限制酶PstⅠ和HindⅢ同时对质粒和目的基因进行切割的原因是_________。
（4）目的基因进入受体细胞并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为_________；要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，经常采用的检测方法是_________技术。

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