2019年底，新冠肺炎在我国大面积流行。病原体为一种新型RNA冠状病毒，即2019-nCoV。科研人员以病毒表面S蛋白作为主要的病毒抗原，拟利用基因工程研制新冠病毒重组蛋白疫苗用于接种预防。图1表示病毒S蛋白的基因，图2表示取自真菌细胞的质粒PcMV及其上部分限制酶切位点，图3表示疫苗制作的简要操作流程。


（1）图3中步骤①所需要的酶和原料是________。步骤②需要的酶是限制酶和__________。
（2）图1中不能选择EcoRI和AccI两种限制酶切割S蛋白基因，原因是_________________。现在科研人员已经可以根据需要在目的基因两端添加需要的限制酶切割位点序列，但是一般不在目的基因的两端添加同一种酶切位点，原因是_________________。若选择两种酶且位点序列添加在S蛋白基因的左右两端（考虑转录的方向）应分别选择__________________。
（3）PcMV质粒上氨苄青霉素抗性基因的作用是____________________________。
（4）将表达载体导入动物细胞中进行培养的原因是______________________。为了检验表达的S蛋白是否与病毒S蛋白有相同的免疫反应特性，可用S蛋白与新冠病毒肺炎康复患者血清进行_____________________实验，进行检测。