科学家首次运用基因工程的手段，导入优质纤维高产基因 KCS，可提高我国棉花 的产量和品质。经过十多年艰苦实验、不断培育，将我国棉花纤维的长度提高了 0．3 厘米， 如今新疆棉花品质位居世界前列。如图 1 表示含有目的基因 KCS 的 DNA 片段长度(bp 即碱基对)和部分碱基序列，图 2 表 示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有 MspI、BamHI、MboI、SmaI 4 种限制性内切核酸 酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为 C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。据图 回答下列问题：

Ⅰ（1）培育转基因棉花需要用到的工具有_____________________。
（2）若用限制酶 SmaI 完全切割图中含有目的基因 D 的 DNA 片段，其产物长度分别为___________。
（3）基因工程中使用的目的基因主要是指____________________ 。重组质粒中除目 的基因外，还必须有_____________________。
（4）若将图 2 中质粒和目的基因 D 通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应 选用的限制酶是_______ 。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因 D 不能正 确表达，其最有可能的原因是____________________ 。
（5）导入目的基因的植物细胞，经过植物组织培养技术得到幼苗，该技术利用的原理是______。
Ⅱ 为了提高转基因的成功率，需要通过 PCR 技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝。
（6）在目的基因进行扩增时，加入的引物有 A、B 两种，引物的作用是_____， 若该目的基因扩增 n 代，则其中含有 A、B 引物的 DNA 分子有____个。
（7）PCR 过程中退火(复性)温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。如表为根据模板 设计的两对引物序列,如图为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退 火温度:_______________。理由是___________________________________ 。
引物对序列表

引物对 A	P1 AACTGAAATGTAGCTATC P2 TTAAGTCCATTACTCTAC
引物对 B	S1 GTCCGACTAGTGGCTGTG S2 AGCTGGCGTTTAGCCTCG