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非选择题-解答题 适中0.65 引用1 组卷354
PCR技术是20世纪80年代发展起来的新技术，广泛应用于分子生物学、基因工程及其他与DNA鉴定相关的领域，如疾病检测、商品检疫、法医鉴定等。回答下列问题：
（1）引物是PCR技术中的关键物质。利用PCR技术扩增某个致病基因时，所设计的一对引物必须具备________和________的特点。
（2）将PCR所需的物质准备完毕后，在PCR仪上用94~96℃的温度预热5 min，其目的是_______________。温度降低到50~60℃后，发生_________，将温度回升至72℃，反应体系中的________酶催化________合成双链DNA。
（3）多重PCR技术在一个反应体系中使用两对以上的引物，可应用于检测食品中的多种致病菌，原因是__________________________。
2021·山东·三模
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知识点：PCR扩增的原理与过程 答案解析 【答案】很抱歉，登录后才可免费查看答案和解析！
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PCR技术应用非常广泛，可用于扩增目的基因，制作探针，引入定点突变，定量检测DNA等。完成下列有关PCR技术和相关应用的问题：
（1）在利用PCR技术扩增某DNA中的某一目的基因时，需要用到的酶是_____________，依据的原理是___________。 PCR技术可用于基因工程四个基本步骤中的__________和__________步骤。
（2）在影响扩增反应的各种因素中，引物的设计最为重要，引物的3′端应采用简并密码较少的氨基酸的对应核苷酸序列，否则会导致扩增的非特异性序列数量__________。
（3）PCR反应后期，由于_____________________（至少写两点）等原因，反应速率会降低。
（4）PCR过程中，温度的控制至关重要，变性温度过低会因为__________，最终都会导致反应效率降低。退火温度过高则会因__________导致目标产物的量__________。 不对称PCR是利用不等量的一对引物来产生大量单链DNA的方法。这两种引物分别称为限制性引物与非限制性引物，其最佳比例一般为1∶50~1∶100，在PCR反应的最初10~15个循环中，其扩增产物最初主要是双链DNA，但当限制性引物消耗完后，非限制性引物引导的PCR就会产生大量的单链DNA。假设反应体系中原来有a个模板DNA，最初10个循环扩增产生双链DNA，后20个循环均只扩增一条链，则需要限制性引物__________个。
PCR技术应用非常广泛，可用于扩增目的基因，制作探针，引入定点突变，定量检测DNA等。完成下列有关PCR技术和相关应用的问题：
（1） PCR技术可用于基因工程四个基本步骤中的______和______步骤。
（2） 在影响扩增反应的各种因素中，引物的设计最为重要，引物的3′端应采用简并密码较少的氨基酸的对应核苷酸序列，否则会导致扩增的非特异性序列数量______。
（3） 在正常变性和退火之后研究某TaqDNA聚合酶的催化效率，得到了下列表格
22℃37℃55℃70℃78℃83℃
子链延伸速率（个核苷酸·秒－1·酶分子－1）0．251．522602500

83℃下没有产物的原因是______。
（4）PCR反应后期，由于______等原因，反应速率会降低。
（5）PCR过程中，温度的控制至关重要，变性温度过低会因为______，最终都会导致反应 效率降低。退火温度过高则会因______导致目标产物的量______。
（6）不对称PCR是利用不等量的一对引物来产生大量单链DNA的方法。这两种引物分别称为限制性引物与非限制性引物，其最佳比例一般为1∶50～1∶100，在PCR反应的最初10～15个循环中，其扩增产物最初主要是双链DNA，但当限制性引物消耗完后，非限制性引物引导的PCR就会产生大量的单链DNA。假设反应体系中原来有a个模板DNA，最初10个循环扩增产生双链DNA，后20个循环均只扩增一条链，则需要限制性引物______个。因为双链DNA和单链DNA的______不同，可通过______将其分离。
对RNA病毒来讲，基因就是有遗传效应的RNA片段。PCR技术可用于病毒基因检测，具有敏感性高、特异性强的特点。一步法RT－PCR是通过反转录将RNA扩增得到大量DNA片段的技术。回答下列问题：
(1)提取RNA病毒甲的H基因时，提取液中需要加入盐酸胍以抑制RNA酶的活性，加入盐酸胍的目的是_________________________。
(2)以病毒甲的H基因为模板，设计上游引物H1和下游引物H2，用一步法RT－PCR对目的基因进行扩增。PCR反应体系如下：

H基因

2.5μL

缓冲液等

5μL

4种脱氧核苷酸

0.5μL

上游引物H1

1μL

下游引物H2

1μL

①酶

1μL

双蒸H2O

14μL


上表中的①酶包括____________________________________。在PCR仪上依次设置不同的循环温度参数：45℃—45min，94℃—30s、55℃—45s、72℃—60s，多轮循环。其中45℃处理和72℃处理的目的分别是_______________________和____________________。
(3)将一步法RT－PCR扩增后的产物进行电泳处理，结果如图所示。其中可能感染病毒甲的样品是________________________。

(4)一步法RT－PCR技术也可用于基因工程目的基因的检测与鉴定。该技术主要用于检测__________________。

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