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非选择题-解答题 较易0.85 引用1 组卷214
EV71是引起手足口病的肠道病毒，遗传物质为RNA。VP1蛋白是该病毒的主要表面抗原，通过基因工程可生产VP1蛋白，用于制备单克隆抗体。回答下列问题：
（1）用EV71感染动物并从动物细胞中提取总RNA，反转录为DNA后进行PCR，获取VP1基因。上述过程所用的酶有_____。
（2）VP1基因的模板链为3’-CCTAGG…VP1基因…TTCGAA-5’，转录时子链的延伸方向和PCR时子链的延伸方向同为5’→3’，根据模板链分析，用于PCR的两个引物的碱基序列为_____（引物为DNA单链，用5’、3’标注方向）。
（3）将VP1基因和质粒混合并用BamHⅠ和HindⅢ进行双酶切（如下图），双酶切的优点是_____。用酶切产物构建重组质粒并加入到含有大肠杆菌的培养液中，温育一段时间后，将菌液涂布在含新霉素和β-葡萄糖苷酸的培养基中。一段时间后，培养基上长出白色和蓝色两种菌落，其中含有重组质粒的菌落是____，判断依据是_______。

（4）工厂化生产VP1蛋白时，培养条件会影响大肠杆菌的VP1蛋白产量，这些培养条件有____（答出3条即可）
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知识点：PCR扩增的原理与过程基因工程的操作程序综合 答案解析 【答案】很抱歉，登录后才可免费查看答案和解析！
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肠道病毒EV71是RNA病毒，其表面蛋白为VP1～VP4，分别由V1～V4基因控制。为研究VP1～VP4的抗原性，从中筛选出EV71的疫苗抗原，研究人员利用基因工程技术生产了上述4种蛋白质。如图是制备V1基因表达载体的过程示意图，请回答下列问题：

gus：控制合成的酶使β-葡萄糖苷酸水解为蓝色物质
Kan：卡那霉素抗性基因
(1)以RNA为模板，通过4组RT-PCR可分别获取V1～V4基因（DNA）。RT-PCR所需要的酶有_____，该过程中子链延伸时所需的能量较为特殊，一般来自_____。
(2)为方便目的基因与质粒的连接，通常将限制酶的切点设计在引物上。引物一般为单链DNA，新合成子链的延伸方向为5’→3’。PCR获取V1基因时，引物中限制酶切点的碱基序列应设计为上游引物3’…_____…5’，下游引物3’…_____…5’。
(3)用相关限制酶处理质粒和V1基因后，再与_____酶混合，加入大肠杆菌温育。一段时间后，将菌液涂布在含有_____和_____的平板上，经培养，在平板上长出白色和蓝色两种菌落，其中_____菌落含有V1基因表达载体，判断依据是_____。
肠道病毒EV71是RNA病毒，其表面蛋白为VP1～VP4，分别由V1～V4基因控制。为研究VP1～VP4的抗原性，从中筛选出EV71的疫苗抗原，研究人员利用基因工程技术生产了上述4种蛋白质。如图是制备V1基因表达载体的过程示意图，请回答下列问题：

（1）以RNA为模板，通过4组RT-PCR可分别获取V1～V4基因（DNA）。RT-PCR 所需要的酶有__________，
该过程中子链延伸时所需的能量较为特殊，一般来自______________。
（2）为方便目的基因与质粒的连接，通常将限制酶的切点设计在引物上。引物一般为单链DNA，新合成子链的延伸方向为5’→3’。PCR 获取V1基因时，引物中限制酶切点的碱基序列应设计为上游引物 3’…___…5’，下游引物 3’…________…5’。
（3）用相关限制酶处理质粒和V1基因后，再与______________酶混合，加入大肠杆菌温育。一段时间后，将菌液涂布在含有______________和______________的平板上，经培养，在平板上长出白色和蓝色两种菌落，其中______________菌落含有V1基因表达载体，判断依据是______________。
（4）通过基因工程制备了VP1～VP4抗原后，需对4种抗原进行检测。检测1：将4种抗原分别注射小鼠，检测小鼠能否产生相应抗体。检测2：这些抗体能否中和EV71病毒（和病毒形成沉淀），结果如下表。

抗原

检测项目

检测1

检测2

VP1

﹢

﹢

VP2

﹣

VP3

﹣

VP4

﹢

﹣

“﹢”表示能，“﹣”表示不能


检测结果表明，____________________可用作 EV71的疫苗抗原。其他3种不能作为 EV71疫苗抗原的理由是______________。
EV71为RNA病毒，能导致人手足口病。利用现代生物技术可制备单克隆抗体，用于此病的检测和治疗。回答下列问题：
（1）VP1是EV71的表面蛋白，是EV71的主要表面抗原，能激发人体产生特异性免疫，因此，VP1能与人体内的_____的表面受体发生特异性结合。
（2）实验室中，让EV71感染培养的动物细胞并提取细胞的总RNA，经RT-PCR获取VP1基因（DNA）。在这个过程中，所需要的酶有_____和Taq酶。在VP1基因扩增过程中需要特定的引物，该引物的作用是_____。
（3）用大肠杆菌作受体菌可以生产VP1．多次注射VP1可提高小鼠体内抗体的效价（浓度），依据是_____。将B淋巴细胞与鼠瘤细胞的悬液混合后，加入PEG和HAT液体培养基，在PEG的作用下促进细胞融合。将上述培养液稀释，加入到含饲养层细胞的多孔玻璃板上，稀释浓度以每个小孔中不超过一个细胞为宜。在这个平板上，饲养层细胞的作用是_____。一段时间后，玻璃板上的一些小孔中会出现细胞集落，加入相应VP1进行检测，发现一些细胞集落呈阳性，构成这些集落的细胞具有_____的特点。
（4）工厂化生产单克隆抗体时，需要优化生产工艺和控制培养条件，这些培养条件有_____（答出2点即可）

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