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非选择题-解答题 适中0.65 引用6 组卷268
乙烯具有促进果实成熟的作用,ACC氧化酶和ACC合成酶是番茄细胞合成乙烯的两个关键酶。利用反义DNA技术(原理如图1),可以抑制这两个基因的表达,从而使番茄具有耐储存、宜运输的优点,下图2为融合ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因的反义表达载体的结构示意图。

(1)图2中的2A11为特异性启动子,则该2A11应在番茄的___ (器官)中启动基因的转录。
(2)从番茄成熟果实中提取___ 为模板,利用反转录法合成ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因,以进行拼接构成融合基因。
(3)合成出的ACC氧化酶基因两端分别含限制酶BamHⅠ和XbaⅠ的酶切位点,ACC合成酶基因两端含SacⅠ和XbaⅠ的酶切位点,用限制酶___ 对上述两个基因进行酶切,再串联成融合基因,相应的Ti质粒应用限制酶___ 进行切割,确保融合基因能够插入载体中。
(4)为了实现图1中反义基因的效果,应将融合基因___ (正向/反向)插入在启动子2A11的下游即可构成反义融合基因。将图中表达载体与农杆菌菌液混合后,接种在含有___ 的培养基中,可筛选出含有反义融合基因的农杆菌,再利用农杆菌转化法获得转基因番茄。
(5)在检测番茄细胞中是否存在反义融合基因时,___(填能/不能)用放射性物质标记的ACC氧化(合成)酶基因片段做探针进行检测,理由是___
19-20高三上·江苏扬州·期末
知识点:其他植物激素的产生、分布和功能基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定 答案解析 【答案】很抱歉,登录后才可免费查看答案和解析!
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乙烯具有促进果实成熟的作用,ACC氧化酶和ACC合成酶是番茄细胞合成乙烯的两个关键酶。利用反义DNA技术(原理见图1),可以抑制这两个基因的表达,从而使番茄具有耐储存、宜运输的优点,下图2为融合ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因的反义表达载体的结构示意图。
   
(1)从番茄体内提取RNA作为模板,通过____合成ACC氧化酶和ACC合成酶基因,合成的基因中____(选填“含”或“不含”)启动子区域。
(2)该技术首先需要合成ACC氧化酶和ACC合成酶的融合基因,通过PCR合成出的ACC氧化酶基因两端分别含限制酶BamHI和Xbal的酶切位点,ACC合成酶基因两端含Sacl和Xbal的酶切位点,用限制酶____对上述两个基因进行酶切,再用DNA连接酶处理形成融合基因,相应的表达载体应用限制酶____进行切割,确保融合基因能够插入载体中。
(3)图2中的启动子2Al1为特异性启动子,为了达到目的,启动子2A1I应在番茄的____(器官)中特异性启动基因转录。将融合基因____(选填“正向”或“反向”)插入启动子下游即可构成反义融合基因。将图中表达载体与农杆菌菌液混合后,接种在含有____的培养基中,可筛选出含有反义融合基因的农杆菌,再利用农杆菌转化法获得转基因番茄。2AII启动子和反义融合基因都应该位于T-DNA片段内,原因是____
(4)在检测番茄细胞中是否存在反义融合基因时,____(选填“能”或“不能”)用放射性标记的ACC氧化酶基因片段做探针进行检测,理由是____
(5))研究人员尝试从个体水平鉴定转基因是否成功,请设计实验方案并预测实验结果:____
乙烯具有促进果实成熟的作用,ACC氧化酶和ACC合成酶是番茄细胞合成乙烯的两个关键酶。利用反义DNA技术(原理如图1),可以抑制这两个基因的表达,从而使番茄具有耐储存、宜运输的优点,下图2为融合ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因的反义表达载体的结构示意图。

(1)图2中的2A11为特异性启动子,则该2A11应在番茄的________(器官)中启动基因的转录。从该器官中提取________为模板,利用反转录法合成ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因,以进行拼接构成融合基因。
(2)合成出的ACC氧化酶基因两端分别含限制酶BamH I和EcoR I的酶切位点,ACC合成酶基因两端含Kpn I和Sau3A I的酶切位点,这四种限制酶及其识别序列和切割位点如下图:
限制性核酸内切酶识别序列和切割位点限制性核酸内切酶识别序列和切割位点
BamH IG↓GATCCKpn IGGTAC↓C
EcoR IG↓AATTCSau3A I↓GATC

先用限制酶________分别对ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因进行切割后,再将它们拼接成融合基因,相应的Ti质粒和融合基因均使用限制酶________进行切割,以确保融合基因能够插入载体中。载体上卡那霉素抗性基因的作用是________
(3)为了获得耐运储存、宜储存的番茄,应将融合基因________(填“正向”或“反向”)插入启动子2A11的下游,原因是________,从而抑制乙烯的合成。在检测该融合基因是否整合到番茄植株的染色体DNA上时,________(填“能”或“不能”)用放射性物质标记的ACC合成酶基因片段做探针进行检测,理由是________

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